猪源抗体基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

来源 :2014年中国畜牧兽医学会养猪学分会学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maxfree99999
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为了制备原核表达猪源单链重组抗体,本实验利用FITC-山羊抗猪IgG标记猪外周血淋巴细胞,通过FACS的方法筛选出IgG+B细胞.以IgG+B细胞为模板,利用RT-PCR技术扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL).测序之后,将扩增的可变区与本实验室保存的猪源抗体恒定区连接.通过Linker序列[(Gly4Ser)3],最终将重链和轻链连接,构成H-linker-L.将该序列连接到原核表达载体pET-28a进行原核表达,纯化.Western-blot鉴定结果表明,该重组蛋白能够与兔抗猪IgG二抗反应.这说明构建的重组抗体确实为猪源抗体.
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