牙龈卟啉单胞菌脂多糖对骨髓基质细胞膜片体内成骨作用研究

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目的:探讨不同浓度的牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)膜片体内成骨能力的影响。材料与方法:分离培养6周龄SPF级雄性SD大鼠BMSCs,采用富含维生素C的培养基连续培养诱导形成细胞膜片,分别以不同浓度(0μg/ml、1μg/ml和10μg/ml)的P.g-LPS作用于BMSCs膜片12h,将上述膜片与羟基磷灰石-磷酸三钙(HA-tricalcium phosphate,HA-TCP)复合后植入6周龄SPF级雄性裸鼠皮下。8周后取材经4%多聚甲醛固定,10%EDTA脱钙,酒精梯度脱水,二甲苯透明,石蜡包埋后进行HE和Masson染色。使用Image J软件计算各组新生骨样组织面积并进行统计分析。结果:组织学染色结果显示P.g-LPS浓度为0μg/ml组和浓度为1μg/ml组均可见大量染色均匀的细胞基质,少量纤维结缔组织以及小血管。1μg/ml组可见大量的立方状成骨细胞围绕贴附于片状的骨样组织边缘,部分成熟的骨样组织联合成连续的板层样。0μg/ml组成骨细胞和骨样组织量相对于1μg/ml组略少且形成的骨样组织中含有少量的未完全成熟的点片状骨样组织。10μg/ml组可见明显的纤维结缔组织,细胞基质较少,成骨细胞数量也较0μg/ml组和1μg/ml组少,且形成的多为散在的未成熟点状骨样组织,面积较小。各组新生骨样组织面积分析结果显示,1μg/ml组新骨形成面积(4.717±0.617)μm~2显著高于10μg/ml组(1.456±0.605)μm~2(p﹤0.001)及0μg/ml组(3.364±0.984)μm~2(p﹤0.005)。10μg/ml组(1.456±0.605)μm~2新骨形成面积显著小于0μg/ml组面积(3.364±0.984)μm~2(p﹤0.001)。结论:BMSCs膜片体内具有良好的骨再生能力,其成骨能力受不同浓度P.g-LPS的影响,低浓度P.g-LPS对BMSCs膜片的成骨能力有一定的促进作用,高浓度P.g-LPS则可显著抑制BMSCs膜片的成骨能力。
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