O型口蹄疫病毒VP1蛋白表达系统的研究进展

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口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的急性、烈性、高度接触性传染的动物疫病。该疫病的最大特点是可快速远距离传播,发病率100%,且病毒的七个血清型(A、O、C、AsiaⅠ、SAT1、SAT2和SAT3)之间无交叉保护,因此被世界动物卫生组织(OIE)认定为动物传染病之首、国际活畜及畜产品通关贸易必检的一类疫病。FMDV为单股正链RNA病毒,基因组全长约8500nt,由5’端非编码区、ORF区(全长6500nt)和3’端非编码区组成。VP1作为ORF区中P1结构蛋白基因编码所得最重要的衣壳蛋白,在其G-H环(141~160位氨基酸)和C末端(200~213位氨基酸)存在两个线性表位,是决定FMDV抗原性、诱导中和抗体和激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。正确表达VP1蛋白,保持其生物学活性与抗原表位的免疫原性,在FMDV基因工程疫苗的研制方面有重要作用。目前用于表达VP1蛋白的主要有原核系统和真核系统两类。原核表达方式目前有利用pET-28a(+)、pET-32a、pET-41b、SUMO作为载体构建重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)、利用p7257-P43作为表达载体转化枯草芽孢杆菌WB800、利用pBAD作为表达载体转化TOP10等,尽管表达量大,但重组蛋白纯化较为困难,且常形成"包涵体",难以保持蛋白的生物学活性。真核表达方式目前有利用含杆状病毒基因组的Bacmid作为重组表达载体转染Sf9昆虫细胞、利用pSuperY作为重组表达载体转染毕赤酵母、利用pBudCE-IFN作为重组表达载体转染BHK-21细胞、用pIRES2-EGFP作为重组表达载体转染239T细胞等,真核表达系统具有较完备的翻译后加工修饰过程,表达出的蛋白更接近于天然构象,具有良好的免疫原性。真核表达系统目前仍多用瞬时转染,因此探究构建真核细胞系的方法,对稳定表达FMDV抗原蛋白、提高疫苗效价、降低基因工程疫苗生产成本都具有重要意义。
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