【摘 要】
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目的 构建可用于致敏物检测的组织工程表皮和THP-1细胞共培养体外模型,并用致敏物验证其特异性.为体外检测物质的致敏性提供新方法.方法 以液下培养的人成纤维细胞为饲养
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目的 构建可用于致敏物检测的组织工程表皮和THP-1细胞共培养体外模型,并用致敏物验证其特异性.为体外检测物质的致敏性提供新方法.方法 以液下培养的人成纤维细胞为饲养层,将人源性角质形成细胞先后进行液下培养和气液界面培养,构建出组织工程表皮,常规石蜡切片,HE染色及泛角蛋白免疫组化染色检测组织工程表皮的结构.将组织工程表皮和THP-1细胞进行共培养,利用致敏物二硝基氟苯(DNFB)和非致敏物十二烷基硫酸钠(SDS)作用于组织工程表皮表面,24 h后ELISA法检测培养液中IL-1β的含量,流式细胞术检测THP-1细胞表面CD86和CD54的平均荧光强度(MFI).结果 角质形成细胞气液界面培养14 d后,HE染色显示组织工程表皮含有8～10层细胞结构,泛角蛋白免疫组化染色阳性.ELISA法检测培养液中IL-1β含量,与溶剂对照组{(129.6±1.9) ng·L-1}相比,DNFB处理组IL-1β含量{(248.8±1.3 )ng·L-1}明显增高(P ＜ 0.05),而SDS处理组{(155.0±1.0) ng·L-1}未见明显变化(P ＞ 0.05).流式测得THP-1细胞表面CD86和CD54的MFI值的变化,与溶剂对照组(183±11,210±21)相比,DNFB处理组(712±7,729±11)明显升高(P ＜ 0.05),SDS组(190±5,233±3)与溶剂对照组未见统计学差异(P ＞ 0.05).结论 成功构建了组织工程表皮和THP-1细胞共培养的致敏物检测模型,通过致敏物和非致敏物的检测选择IL-1β、CD86和CD54为判断指标,可以初步出鉴定物质的致敏性,为致敏物的体外毒理替代检测提供了新方法.
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