线粒体通透性转换孔在硫酸铍致人胚肺成纤维细胞凋亡中作用的研究

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目的:研究线粒体通透性转换孔(mPTP)在硫酸铍(BeSO4)致体外培养人胚肺成纤维细胞凋亡中的作用,并观察mPTP开放抑制剂环孢霉素A(CsA)与促开放剂苍术苷(ATR)对此作用的干预。方法:体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),采用CCK-8法确定CsA和ATR干预剂量;试验分空白对照组、BeSO4染毒组(剂量分别为1、10、100μM)、干预组(10μM CsA+10μM BeSO4和10μM ATR+10μM BeSO4)、干预对照组(10μM CsA和10μM ATR);体外培养24h、48h、72h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR检测AIF mRNA表达,Western Blot检测各剂量组AIF蛋白表达水平。结果:(1)染毒24h、48h、72h,CCK-8法确定CsA和ATR干预剂量均为10μM。(2)低、中、高剂量BeSO4染毒细胞24h、48h、72h,细胞凋亡率均低于同时相空白对照组(P<0.05);CsA干预48h、72h,细胞凋亡率明显低于同时相空白对照组(P<0.05);ATR干预24h、48h、72h,细胞凋亡率明显高于10μM BeS04染毒组(P<0.05)。(3)低、中、高剂量BeSO4染毒24h、48h、72h,AIF的mRNA表达水平均低于同时相空白对照组(P<0.05);CsA干预24h、48h、72h,AIF mRNA表达明显低于同时相空白对照组(P<0.05);ATR干预24h、72h,AIF mRNA表达与同时相空白对照组相比有统计学意义(P<0.05)。(4)低、中、高剂量BeSO4染毒细胞48h,AIF蛋白的表达水平低于同时相空白对照组(P<0.05);CsA干预48h,AIF蛋白表达量低于同时相空白对照组(P<0.05);ATR干预72h,AIF蛋白表达量高于同时相10μM BeSO4染毒组(P<0.05)。结论:BeSO4可抑制人胚肺成纤维细胞凋亡;线粒体通透性转换孔在BeSO4致人胚肺成纤维细胞凋亡中发挥了一定的作用;经CsA与ATR干预进一步验证了线粒体通透性转换孔的作用。
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