目的:探索一种简单快速无需分开表皮和真皮即可分离得到人上皮细胞并进行体外培养的方法。方法:取皮肤组织切碎后,用含分散酶和Ⅰ型胶原酶的消化液37℃浸泡60 min,然后加入胰酶消化30 min,获得单个细胞;用100μm细胞过滤器过滤,离心后,用含10 mmol/L Rock蛋白激酶抑制剂Y-27632的DMEM培养基(含10%FBS)培养,3天后换成Cn T07培养基。免疫组化法检测培养传代的细胞的分化状态,移植法检测培养传代细胞在体内的再生能力结果:与传统分散酶分离表皮角质形成细胞方法相比,用此方法分离得到的表皮角质形成细胞数量较多,以克隆形式生长并且生长较快;传代后细胞呈角质细胞形态主要表达未分化的角质蛋白k5并高表达beta1 integrin,移植体内后能形成正常分化的皮肤表明该方法分离细胞的具有再生皮肤的能力。采用新方法能成功有效地从带毛发的头皮组织分离上皮细胞。结论:本报道介绍一种体外分离培养人上皮细胞的新方法,该方法简便、快速、适合各种上皮组织如带毛发的头皮、牙龈组织和带脂肪的各种上皮组织。这种分离方法与传统的分离方法相比,得到的细胞生长状态及形成单克隆的能力都优于传统方法。为将来作为上皮组织工程种子细胞和皮肤毛发牙龈等上皮组织再生研究及临床应用奠定基础。