【摘 要】
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将不同纤维素酶基因融合并实现共表达,以提高纤维素的降解效率.本研究从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中扩增得到两个纤维素酶基因Cel042和Cel22,将其分别重组入大肠杆菌表达载体pET32a(+),构建出重组质粒pET32a-Cel042、pET32a-Cel22.利用柔性接头GSGGGS,通过T克隆将两纤维素酶基因融合后,插入pET32a(+)构建出重组表达载体pET32a-Cel042-Cel
【机 构】
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河南科技大学宏翔生物饲料实验室,河南洛阳4710032 河南科技大学宏翔生物饲料实验室,河南洛阳4
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会暨饲料饲草学分会2015年度学术交流会
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将不同纤维素酶基因融合并实现共表达,以提高纤维素的降解效率.本研究从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中扩增得到两个纤维素酶基因Cel042和Cel22,将其分别重组入大肠杆菌表达载体pET32a(+),构建出重组质粒pET32a-Cel042、pET32a-Cel22.利用柔性接头GSGGGS,通过T克隆将两纤维素酶基因融合后,插入pET32a(+)构建出重组表达载体pET32a-Cel042-Cel22.将三种重组子分别转化大肠杆菌Escherichia eoliBL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE结果表明表达的蛋白大小分别为74kDa、44kDa、101kDa,与理论值吻合.酶活测定结果显示三种重组体表达的纤维素酶活力分别为29.98U/mL、20.87U/mL和57.62U/mL.酶学性质研究表明融合后的双纤维素酶Eg8c反应的最适温度为50℃,最适pH为6.0;纯化后的酶在pH4～8之间保持75％以上活性.温度在40～70℃之间,可维持70％酶活效力.Mn2+对该酶有较强激活作用,而Hg2+和乙二胺四乙酸(EDTA)则抑制作用明显.不同纤维素酶的融合表达形式,为研究新的纤维素降解途径奠定了基础.
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