论文部分内容阅读
[目的]阿托品是一种从颠茄、曼陀罗及莨菪等茄科植物中提取的抗胆碱药物,超剂量摄入具有较大的毒害作用,易导致机体出现排汗受阻、面色潮红、呼吸急促、心动过速、排尿困难等不良反应,且能通过乳汁分泌对婴幼儿产生极大的危害。近年来发现不法分子屠宰前给猪注射阿托品的现象,阿托品大量残留在动物组织中,严重威胁消费者健康。本研究建立了猪尿中阿托品残留检测ELISA方法,为生猪宰前快速筛查提供了新手段。[方法]本研究对包被原的种类、包被原与抗体的最佳稀释度、包被方式、封闭液种类、封闭时间、竞争时间、显色时间等进行一系列的条件优化,建立了间接竞争ELISA检测方法;同时摸索了猪尿样本前处理方法。确定了方法的添加回收率、批内批间变异系数范围,并对结构类似物东莨菪碱等进行交叉反应率检测。[结果]本研究所建立的间接竞争ELISA方法经过优化后,包被原的最佳浓度为5.8ngmL-1,抗体的最佳稀释度为1:120000;标准曲线的回归方程为y=A2+（A1-A2）/（1+（x/x0）^p）,A1=1.76252,A2=0.10114,x0=4.89811,p=1.09189,R2=0.99966,该ELISA方法在猪尿中IC50为4.89 ng mL-1,线性范围1.37～17.44 ng mL-1,检测限为0.65 ng mL-1。猪尿样本添加高中低三个浓度的阿托品标准品后经过5倍稀释,添加回收率在70-95%之间,批内与批间变异系数小于10%,表明该方法具有良好的准确性与重复性。与其结构类似物后马托品、东莨菪碱、山莨菪碱的交叉反应率为76.6%、20.4%、1%,交叉反应良好。通过与LC-MS/MS结果进行比较,所建立的ELISA方法具有良好的相关性。[结论]本研究建立了猪尿中阿托品残留检测的间接竞争ELISA方法,为保障动物健康和食品安全提供了技术支撑,具有较好的应用前景。