论文部分内容阅读
通过PCR合成了C端带有6×His-tag标记的胞外区的重组糖蛋白对应的DNA序列,随后在汉逊酵母中进行了表达。合成的糖蛋白基因在初筛中都没有发现明显的分泌表达,通过Western blot对胞内表达情况进行了分析,发现在胞内大量重组蛋白发生降解。于是在汉逊酵母中共表达分子伴侣和糖蛋白基因,以协助糖蛋白进行翻译后的正确修饰而分泌到胞外。结果表明共表达汉逊酵母来源的Cne1（HpCne1）工程菌可分泌表达狂犬病病毒糖蛋白（最高分泌量可达3.8 mg/L）,表明大量分泌表达狂犬病病毒糖蛋白的瓶颈可能主要在于翻译后的N-糖基化正确修饰。而共表达汉逊酵母来源的Kar2（HpKar2）及酿酒酵母来源的Cne1（ScCne1）和Kar2（ScKar2）的工程菌株仍然没有筛选到分泌表达株。然后利用Ni2+柱亲和层析纯化重组糖蛋白,并经Western blot分析,结果表明:该重组蛋白能与狂犬病毒抗体反应,具有良好的反应原性。