【摘 要】
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为进一步了解鸭疫里默氏杆菌外膜磷脂酶A(RaOMPLA)基因的功能，本研究根据NCBI上己发表OMPLA的氨基酸序列(由pldA基因编码)，利用生物信息学方法分析其保守结构序列，应用CODEHOP在线软件设计简并引物，PCR扩增获得一长428 bp的RapldA基因部分序列；根据此序列与其它细菌的pldA基因序列进行比对分析，参照E.coli pldA基因序列设计上下游延伸引物，扩增获得了一长34
【机 构】
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广东省农业科学院兽医研究所 广东省兽医公共卫生公共实验室,广州 510640
【出 处】
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第二届全国禽病分子生物技术青年学者论坛
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为进一步了解鸭疫里默氏杆菌外膜磷脂酶A(RaOMPLA)基因的功能，本研究根据NCBI上己发表OMPLA的氨基酸序列(由pldA基因编码)，利用生物信息学方法分析其保守结构序列，应用CODEHOP在线软件设计简并引物，PCR扩增获得一长428 bp的RapldA基因部分序列；根据此序列与其它细菌的pldA基因序列进行比对分析，参照E.coli pldA基因序列设计上下游延伸引物，扩增获得了一长3400 bp的序列。生物信息学分析显示RapldA基因的完整ORF为870 bp，推导氨基酸为289 aa，与其它物种OMPLA氨基酸序列的相似性最高为99%。本研究首次克隆获得并重组表达了pldA基因，重组表达产物rRaOMPLA具有磷脂酶A的水解活性，MAFP对rRaOMPLA的体外酶活性具有抑制作用，以同源重组的方法构建突变体RaΔplpA：：erm，对其生物学特性的研究发现突变体的毒力较亲本株有所下降，证实RaOMPLA是R.anatipestifer的潜在致病因子。
其他文献
为了进一步探讨马立克氏病病毒(MDV)诱导肿瘤发生发展机制，本研究采用基因芯片技术，筛选MDV诱导鸡肝脏肿瘤形成的相关基因表达谱，共得到269个差异表达基因，其中上调的有175个，下调的有94个。经实时荧光定量RT-PCR验证后，用生物信息学工具(IPA)对表达基因进行功能注释与分析。结果表明只有171个基因是已知的，98个基因是功能未知的，另外差异表达基因变化最显著的生物学功能有75种。基因网络
分别在正常环境和限铁环境下培养1型鸭疫里默氏杆菌，提取分泌蛋白。应用双向电泳和质谱技术比较在两种培养环境下鸭疫里默氏杆菌分泌蛋白的表达差异。结果显示，在限铁环境下鸭疫里默氏杆菌分泌蛋白中表现出表达量上升的蛋白质点共有23个，选取差异明显的13个点做质谱分析，这13个蛋白质点分别代表7种蛋白质，其中1个是Ⅲ型纤维连接蛋白，1个是分泌蛋白家族，1个是酶类，1个是亮氨酸富集蛋白质，4个是鸭疫里默氏杆菌假
为进一步了解鸭疫里默氏杆菌patatin样磷脂酶基因的功能，根据本实验室构建的RA1基因组表达文库及ivi基因筛选获得一长444 bp的Raplp部分序列，以改良的SiteFinding-PCR方法延伸序列，扩增获得了一长4662 bp的序列。生物信息学分析显示，Raplp基因的完整ORF为2061 bp,推导氨基酸为686 aa，与其它物种PLP氨基酸序列的相似性最高为23 %。本研究首次克隆获
本研究对黑龙江省两个养鸡场临床疑似感染鸡传染性喉气管炎的病鸡喉头和气管进行病料采集，进行鸡胚绒毛尿囊膜接种和人工感染易感鸡实验，观察鸡传染性喉气管炎的典型病变和临床症状。根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒gB、TK基因序列设计合成2对引物对分离株基因组DNA进行扩增和序列测定。结果表明分离株在鸡胚绒毛尿囊膜和人工感染鸡上均出现了鸡传染性喉气管炎的典型病变和临床症状。序列分析显示，扩增获得
2011年4月份，河北省某地一些鸭场饲养的20-45日龄的樱桃谷肉鸭发生了以腹腔中充满大量清亮、茶色或啤酒样腹水为主要病变特征的疾病，即鸭腹水综合征。采集两个不同日龄的病死鸭肝脏样品，接种SPF鸭胚进行病毒分离，获得两个病毒分离物(HB01和HB02)。这两个病毒分离物对鸡、鸭和鹅的红细胞均无血凝活性。RT-PCR或PCR检测表明，HB01和HB02中鸭肝炎病毒检测为阳性，而鸭呼肠孤病毒、鸭圆环病
2009年12月吉林省某公司42日龄蛋雏鸡的背部无毛和少毛处出现大面积痘疹，发病后10日内全部死亡。剖检病死鸡除部分在口角、翅下等处可见大小不等痘疹外，其他组织器官未见异常。经绒毛尿囊膜途径接种SPF鸡胚后，可在尿囊膜上见到灰白色隆起的痘斑。用各型禽流感病毒通用引物、新城疫病毒引物、传染性法氏囊病毒引物、鸡痘病毒引物对皮肤病料和尿囊膜进行PCR扩增，仅鸡痘病毒引物扩增为阳性。将分离获得的鸡痘病毒分
马立克氏病和网状内皮组织增殖病是一种传染性致肿瘤性免疫抑制性疾病，对我国养鸡业造成了巨大损失。本研究，构建了真核表达质粒pBud-env，把env表达盒通过Red/ET同源重组插入到已经构建好的重组马立克病毒rCV1988，形成重组马立克病毒rCV1988-env，并且研究了rCV1988-env体内外增殖情况。研究表明，成功的构建了能够表达env基因的rCV1988并且rCV1988-env体内
将表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的重组假型杆状病毒(Ac-V-S1)以2×109 pfu剂量腿部肌肉注射7日龄SPF雏鸡，21日龄加强免疫一次。血清抗体检测表明，灭活疫苗组诱导的IBV特异性ELISA抗体水平最高，极显著高于其它试验组(P<0.01)，其次是Prime—boost组(先免疫Ac—V—S1后免疫poly156S1亚单位疫苗)和Ac-V-S1组；但在细胞免疫水平方面，Ac-
为了克隆鹅β-防御素(AvBD)3基因，并在原核表达重组鹅AvBD3蛋白，进一步研究鹅AvBD3蛋白的生物学特性，本研究利用RT-PCR方法从鹅脾脏和法氏囊组织中扩增到鹅AvBD3基因片段，其cDNA片段大小为182 bp，编码60个氨基酸残基。经同源性分析发现鹅AvBD3氨基酸序列与鸡AvBD3氨基酸序列同源性最高，为100％。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1的BamHⅠ和Sel
为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性，本研究采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5，将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp，编码66个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基，分别在分子内形成Cys1-Cys5，Cys2-Cys4，Cys3-Cys6