【摘 要】
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目的:探索4种nucroRNA在体外诱导人细胞朝向心肌细胞分化中的影响.方法:构建4种nucroRNA的过表达慢病毒载体,利用293T细胞进行病毒包装,确定最适感染复数;人iPS细胞悬滴培养2d形成拟胚体后貼壁培养,病毒感染24后除去病毒,培养细胞共14d;收集dO,7,14的细胞样品,real-time PCR分别检测细胞内对应microRNA的相对表达水平和心肌细胞marker的相对表达水平.
【机 构】
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上海生物制品研究所有限责任公司第二研究室
【出 处】
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2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会
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目的:探索4种nucroRNA在体外诱导人细胞朝向心肌细胞分化中的影响.方法:构建4种nucroRNA的过表达慢病毒载体,利用293T细胞进行病毒包装,确定最适感染复数;人iPS细胞悬滴培养2d形成拟胚体后貼壁培养,病毒感染24后除去病毒,培养细胞共14d;收集dO,7,14的细胞样品,real-time PCR分别检测细胞内对应microRNA的相对表达水平和心肌细胞marker的相对表达水平.结果:(1)成功构建4种microRNA过表达慢病毒载体,病毒滴度均达1×1O7TU/ml以上;(2)荧光显微镜下,细胞GFP呈阳性,4种慢病毒成功感染人iPS细胞,胞内对应microRNA上调表达,差异显著;(3)在诱导分化的d14,心肌细 胞特异基因及转录因子均上调表达,差异显著.结论:(1)成功建立4种microRNA过表达人iPS细胞模型;(2)4种microRNA对人iPS细胞在体外朝向心肌细胞分化有促进作用.
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