锰对SHSY5Y细胞SIRT1基因相关miR-138-5p、 miR-29a-3p表达的影响

来源 :2016中国毒理学会神经毒理专业委员会学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liaotianeryi
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  目的 探讨锰处理SHSY5Y细胞中miRNA的差异表达及其相关靶基因表达的影响.方法:以500 μmol/L MnCl2处理SHSY5Y细胞0h、2h、4h、6h、8h后用MTT检测细胞活力;选取500 μmol/LMnCl2 6 h处理组与对照组分别进行miRNA芯片检测,分析差异表达的miRNA差异倍数(FC≥2.0且P≤0.05);挑选个差异表达的miRNA(miR-138-5p、miR-29a-3p),通过TargetScan,PITA,microRNAorg数据库对差异miRNA进行靶基因预测,取交集用于靶基因的筛选;用RT-PCR和western分别检测靶基因SIRT1基因和蛋白表达情况.结果:500 μmol/L MnCl2处理SHSY5Y细胞后,细胞毒性呈时间依赖性,时间越长细胞毒性越明显.miRNA芯片结果显示,与对照组相比,处理组中miR-138-5p和miR-29a-3p表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),此结果也在定量即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)试验中得到了验证.同时,我们使用qRT-PCR和免疫印迹试验(Western Blot)发现靶基因SIRT1基因mRNA水平和蛋白水平的表达上调.结论:锰能够引起SHSY5Y细胞miR-138-5p、miR-29a-3p表达下调及相关靶基因SIRT1表达上调.SIRT1基因表达上调与细胞自噬作用密切相关,因此miR-138-5p、miR-29a-3p可能通过靶向作用于SIRT1基因影响锰诱导的SHSY5Y细胞自噬.
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