论文部分内容阅读
(目的)为了探讨PI3K/Akt信号通路在E.tenella入侵宿主细胞凋亡中的作用,(方法)选用放线菌素D(Act D)诱导建立鸡胚盲肠细胞凋亡模型,感染E.tenella子孢子后,检测感染组和未感染组E.tenella宿主细胞感染率、宿主细胞凋亡率以及Caspase-3酶活性的动态变化;用PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002)处理鸡胚盲肠上皮细胞,感染E.tenella子孢子后,检测处理组和非处理组E.tenella宿主细胞线粒体通透性转换(MPTP)孔的开放情况、p-Akt、Bad、NF-κB的表达量以及Caspase-9、Caspase-3酶活性的动态变化,同时测定各组E.tenella宿主细胞感染率、宿主细胞凋亡率。(结果)结果显示:与空白对照组相比,接种E.tenella子孢子后4 h,宿主细胞凋亡率显著(P<0.05)降低,12~20 h显著(P<0.05)升高;接种E.tenella子孢子后4~20 h,接种子孢子并添加Act D组宿主细胞早期凋亡率、晚期凋亡/坏死率、Caspase-3酶活性均极显著(P<0.01)低于凋亡诱导剂组(添加凋亡诱导剂但不接种子孢子)。接种E.tenella子孢子后4h~20 h,宿主细胞p-Akt含量均高于空白对照组;与子孢子接种不加药组相比,接种子孢子并添加LY294002组宿主细胞p-Akt含量降低,宿主细胞早期凋亡率、晚期凋亡/坏死率显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高,宿主细胞MPTP孔的开放程度升高。接种E.tenella子孢子后4~12 h,与空白对照组相比,子孢子接种不加药组宿主细胞Bad含量、Caspase-9、Caspase-3酶活性显著(P<0.05)降低,NF-κB表达量极显著(P<0.01)升高;与接种子孢子并添加PI3K/Akt信号通路抑制剂组相比,宿主细胞Bad、NF-κB、Caspase-9、Caspase-3酶活性极显著(P<0.01)或显著降低。表明E.tenella发育的早期可抑制宿主细胞凋亡;且可以通过下调Caspase-3的活性来抑制其宿主细胞凋亡,之后上调Caspase-3的活性促进凋亡。PI3K/Akt信号通路可以通过下调Bad表达,限制线粒体通透性转换孔的开放,降低Caspase-9、Caspase-3活性,抑制感染早期E.tenella宿主细胞的凋亡。