【摘 要】
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目的 构建欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗并对其免疫原性进行分析,为预防欧洲型PRRSV的感染提供依据.材料与方法 PCR扩增欧洲型蓝耳病ORF3、ORF5目的基因,将其连接到腺病毒穿梭质粒构建重组腺病毒穿梭质粒pacad-EU-ORF3、pacad-EU-ORF5、pacad-EU-ORF3-ORF5,将重组腺病毒穿梭质粒与骨架质粒共同转染至HEK 293细胞,构建重组腺病毒rAd-EU-ORF3
【机 构】
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吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春,130118;军事医学科学院军事兽医研究所,吉林长春,130122
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会
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目的 构建欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗并对其免疫原性进行分析,为预防欧洲型PRRSV的感染提供依据.材料与方法 PCR扩增欧洲型蓝耳病ORF3、ORF5目的基因,将其连接到腺病毒穿梭质粒构建重组腺病毒穿梭质粒pacad-EU-ORF3、pacad-EU-ORF5、pacad-EU-ORF3-ORF5,将重组腺病毒穿梭质粒与骨架质粒共同转染至HEK 293细胞,构建重组腺病毒rAd-EU-ORF3、rAd-EU-ORF5、rAd-EU-ORF3-ORF5,并对构建的病毒用western blot方法进行验证.将构建的病毒免疫Balb/c小鼠,并通过特异性抗体水平及淋巴细胞增殖试验对重组腺病毒疫苗的免疫原性进行初步分析.结果与讨论 western blot结果显示重组病毒可稳定表达目的蛋白；特异性抗体检测结果显示血清中GP3蛋白抗体的OD值在35d时达到最高为0.32,是PBS组的2.3倍(P＜0.05),而GP5蛋白抗体的OD值为0.28,为PBS组的2倍(P＜0.05)；小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示重组腺病毒rAd-EU-ORF3-ORF5刺激指数为PBS组1.5倍(P＜0.05),表明重组腺病毒疫苗无论是体液免疫还是细胞免疫,均能提高机体的免疫应答水平.结论 成功包装出重组腺病毒rAd-EU-ORF3,rAd-EU-ORF5,rAd-EU-ORF3-ORF5,动物实验显示其具有良好的免疫原性.
其他文献
外源基因在重组病毒中的表达常表现出不稳定性,因此,一个可稳定表达外源荧光蛋白标签的高致病性PRRSV感染性克隆对于研究病毒生物学特性而言将是一个有效工具。在不同的病毒拯救系统中,细菌人工染色体(bacterial artificial chromosomes,BAC)系统较其他拯救系统具有大片段可容性和复制的高保真性,且易于操作。
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重危害世界养猪业的重要病毒性传染病,其主要特征为妊娠母猪流产、死产、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍、各年龄阶段猪的呼吸道症状,对于该病迄今仍无确实有效的防制措施.病毒进入细胞以及复制增殖的过程,触发和调控了宿主细胞的抗病毒免疫反应等一系列相互作用.microRNA是一类小的单链非编码RNA,其在病毒与宿主的相互作用中发挥着
引言 猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种高度接触性传染病,可引起种猪繁殖障碍,仔猪呼吸道综合征、神经症状、腹泻、生长发育受阻等主要症状,同时PRV也是引起猪呼吸系统疾病综合征的重要原发性病原之一。目前,我国主要应用基因缺失苗(如gE缺失苗)进行免疫预防,因此与之相配套的gE-ELISA鉴别诊断试剂盒能够快速、准确检测
引言猪繁殖障碍性疾病是一大类影响养猪业的常见疾病，如乙脑同时也是人兽共患病。在发病的猪群中，猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流行性乙型脑炎(JEV)、猪瘟(CSF)是致病性较高的也是较为常见的由RNA病毒引起的发病。病原体混合感染是目前猪场疫病的普遍现象，猪蓝耳病、猪瘟、猪流行性乙型脑炎三种疾病临床症状相似且常常发生混合感染，本研究旨在进行PRRS-JEV-CSF可视化共检基因芯片的构建并进行初步应
引言 鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)是具有广泛的宿主，是目前世界各国分离率最高的菌型之一。该菌能引起各种哺乳动物以及人类发生全身性感染，具有重要的公共卫生意义。本研究以鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株为研究对象进行生物学特性的检测，进一步对cya基因缺失株的减毒机制进行初步研究。材料与方法 本研究以鼠伤寒沙门菌亲本菌株SL1344以及cya基因缺失株为研究对
引言 磁性纳米粒子是近几年发展起来一种新型材料，与免疫学相结合，广泛应用于病理、药理、分子遗传学和微生物等领域。尤其在免疫检测方面，逐渐受到重视。出血性大肠杆菌(EHEC)主要存在O157、O26和O111等几种血清型，其中主要以O157∶H7为典型菌株，是一种动物源性传染病，牛和少数反刍动物为贮存宿主，对人有很强的致病力。本研究主要是建立一种灵敏性较高、特异性较好的分离O157∶H7的免疫磁珠检
前言 自2012年以来,由伪狂犬病毒变异株引发猪伪狂犬病在华中、东北再次爆发,继而蔓延到全国大多数省份。发病的特点是各种年龄的猪可感染,只是不同年龄段表现的症状和死亡率有所区别,怀孕母猪发生死产、死胎、木乃伊胎等；哺乳仔猪通常会伴有典型的神经症状、腹泻等；成年猪症状常不明显。广东北部某猪场在引进种猪1个月后,约15％的母猪在不同妊娠阶段出现流产,母猪出现流产半个月后,初产仔猪开始发病,弱仔增多,7
引言 干扰素是先天免疫的重要组成成分,其中Ⅰ型干扰素与特异受体结合后可以诱导产生多达300种的干扰素刺激基因(ISGs).Viperin是近年来新发现的一种ISG,已有研究证明它对多种病毒具有抗病毒活性,如HCMV、流感病毒、丙型肝炎病毒(HCV)、西尼罗河病毒(WNV)、登革热病毒等.猪瘟是危害养猪业发展的重要病毒病.
前言 猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus, PEDV)引起猪的一种接触性肠道传染病,各种年龄的猪均能感染发病,临床症状主要表现为腹泻、呕吐和脱水,其中以哺乳仔猪感染后的危害最为严重,病死率可高达100％。为了解流行PEDV毒株的变异情况,本研究室前期开展了PEDV的S、N和O
引言 副猪嗜血杆菌(HPS)可引起猪的格民病,临床上以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主要特征。该病原菌中存在Cpx信号转导系统,Cpx系统主要由组氨酸激酶(histidine kinase,HK)CpxA和反应调节蛋白(response regulator, RR) CpxR组成。可感应细菌周围环境中的各种应激,通过介导相关基因的转录和表达,调控细菌的致病性、耐药性、生物被膜形成等许多生物