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前言β-丙内酯(BPI)是一种杂环化合物,对病毒具有很强的灭活作用,并且具有极易水解成无毒无害物质的特性,目前在国外广泛应用于各种疫苗的灭活。本研究通过应用β-丙内酯作为H9N2禽流感病毒灭活剂,对病毒灭活效果、灭活剂残留量、疫苗安全性和疫苗免疫效力等多个方面进行了研究,为β-丙内酯能否代替甲醛进行禽流感病毒的灭活提供参考依据。材料与方法(1)灭活条件的优化:β-丙内酯以不同浓度、不同灭活时间、不同pH值条件下对H9N2鸡胚毒进行4℃灭活,然后37℃水解2h,最后检测灭活效果及灭活前后胚液HA效价。(2)β-丙内酯残留量检测:对灭活后鸡胚液和免疫疫苗后肌肉进行残留量检测。(2)动物免疫试验:按照优化后的灭活条件灭活H9N2的SPF鸡胚毒液和海兰鸡鸡胚毒液,用常规浓度为0.1%甲醛量灭活作对照,然后分别制备成油乳剂灭活苗免疫SPF鸡和广西土鸡,另设生理盐水、大华农商品苗免疫组作对照组,定期检测免疫鸡血清AIV-H9 HI抗体变化情况。结果与分析(1)β-丙内酯灭活条件的优化:试验结果显示β-丙内酯对禽流感H9N2病毒胚液最佳的灭活条件为β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000灭活24h或β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000灭活18h;本实验设定的三个pH值(6.5、7.0、7.5)对病毒灭活效果的影响不明显;β-丙内酯灭活后的胚液HA效价下降在1个滴度以内,甲醛对照组灭活后的胚液HA效价下降为1~2个滴度。(2)残留量检测结果:H9N2鸡胚毒液经β-丙内酯灭活和水解后,鸡胚液和SPF鸡、广西土鸡免疫疫苗肌肉中未检测到β-丙内酯残留,且免疫鸡无异常发生,说明β-丙内酯在灭活后的37℃水浴中完全水解,在疫苗中无残留,对动物机体安全性高。(3)动物免疫试验结果:SPF鸡胚毒液制备的油苗和大华农油苗免疫SPF鸡和广西土鸡后均产生了较高HI抗体,并且持续到90天时,都能维持在较高的抗体水平(SPF鸡HI抗体为91og2以上,广西土鸡HI抗体为8log2以上),其中β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000油苗组与0.1%甲醛油苗组、大华农油苗组的抗体水平差异较小,介于0~1.5log2之间,优于β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000油苗组。海兰胚毒液制备的油苗免疫SPF鸡和广西土鸡后均产生了较高的HI抗体,并且持续到90天时,都能维持在较高的抗体水平(SPF鸡HI抗体为91og2以上,广西土鸡HI抗体为7log2以上),其中β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000油苗组与0.1%甲醛油苗组、大华农油苗组的抗体水平差异较小,介于0~2 log2之间,略优于β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000油苗组。结论本研究结果显示β-丙内酯具有对H9N2灭活能力强HA效价影响小、极易水解成对机体无害产物而无残留等优点,以β-丙内酯作为灭活剂制备的H9N2灭活疫苗与甲醛作为灭活剂制备的H9N2灭活疫苗免疫SPF鸡和广西土鸡免疫效果相当,这一结果为β-丙内酯能否代替甲醛进行禽流感病毒的灭活提供了参考依据。