【摘 要】
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目的 探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法.方法 应用心肌细胞消化液重复消化出生第1-3天乳鼠的心肌组织多次；收集的细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基中和.通过差速贴壁分离法分离后,加入红细胞裂解液,以除去红细胞,加入溴脱氧尿嘧啶(Brdu)纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育并无血清同步化,获得心肌细胞.通过细胞计数、MTT法、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)免疫荧光鉴定等方法比较不同的心肌细胞消化
【机 构】
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河南中医学院,河南郑州450000 河南中医学院第一附属医院中心实验室,河南郑州450000
【出 处】
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第十四届中南地区实验动物科技交流会
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目的 探讨提高新生大鼠原代心肌细胞纯度的方法.方法 应用心肌细胞消化液重复消化出生第1-3天乳鼠的心肌组织多次；收集的细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养基中和.通过差速贴壁分离法分离后,加入红细胞裂解液,以除去红细胞,加入溴脱氧尿嘧啶(Brdu)纯化心肌细胞后置CO2培养箱孵育并无血清同步化,获得心肌细胞.通过细胞计数、MTT法、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)免疫荧光鉴定等方法比较不同的心肌细胞消化液(0.08％胰蛋白酶、0.08％心肌细胞消化液、0.1％胰蛋白酶、0.16％胰蛋白酶和0.16％胶原酶)、不同的差速贴壁方法(差速贴壁1次,90min；差速贴壁2次,每次45min；差速贴壁2次,每次1h)、不同的抑制心肌成纤维增殖的方法(连续加入Brdu 3天,24h换一次液,连续换2次；连续加入Brdu 2天、24h换一次液,无血清1天；连续加入Brdu 2天、24h换一次液,无血清2天)所得到的心肌细胞的产量、活性、纯度.
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