【摘 要】
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以质粒pSilencer2.1-U6 Hygro为基础,设计并构建了针对狂犬病病毒(RV)糖蛋白和核蛋白mRNA的共9个siRNA表达载体,转染BHK-21细胞系后,在潮霉素-B的筛选压力下,获得9个稳定转录相关siRNA的BHK-21细胞株.1000TCID50的RV分别感染24孔板内的上述9株细胞,48h后以直接免疫荧光法检测各株细胞上RV的增殖,结果显示,RV增殖水平最低者为对照细胞的1％,
【机 构】
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军事医学科学院,军事兽医研究所,吉林,长春,130062 沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁,沈阳,1
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以质粒pSilencer2.1-U6 Hygro为基础,设计并构建了针对狂犬病病毒(RV)糖蛋白和核蛋白mRNA的共9个siRNA表达载体,转染BHK-21细胞系后,在潮霉素-B的筛选压力下,获得9个稳定转录相关siRNA的BHK-21细胞株.1000TCID50的RV分别感染24孔板内的上述9株细胞,48h后以直接免疫荧光法检测各株细胞上RV的增殖,结果显示,RV增殖水平最低者为对照细胞的1％,即RNA干扰效应最高可阻断99％RV的感染.针对其中阻断水平超过90％的靶序列G69和N19,人工合成其双链siRNA,瞬时转染BHK-21细胞后,仍可达到80％以上的感染阻断率.针对靶序列G69的siRNA表达质粒300ug肌注小鼠后肢,再以350 LD50狂犬病病毒同部位注射攻毒,保护率为80％.本试验为有效阻断RV早期感染提供了新选择,为通过RNAi研究RV的基因组功能奠定了基础.
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