复合干扰素复性上清组分分析及复性条件对各组分的影响

来源 :第二届全国化学工程与生物化工年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leneyao
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蛋白质折叠复性是基因工程蛋白药物生产的关键步骤。对许多蛋白质复性的研究常用总活性回收率评价,往往对复性后蛋白质溶液的组成缺乏详细分析。研究复性组成有助于寻找最优的复性条件,同时也有助于加强对复性过程的认识。本文采用SE-HPLC、RP-HPLC 及SDS-PAGE等多种分析手段分析还原变性的复合干扰素包涵体稀释复性时复性上清的组成,发现复性上清中含有多种复合干扰素组分,包括寡聚体、二聚体及单体,证实单体中除正确折叠的天然结构外,还含有部分氧化的复性中间体,同时发现复性中间体在一定条件可氧化为天然结构或聚积体。文章进一步考察了pH 值及氧化还原对GSH/GSSG 对复性各组分的影响。发现pH 值对天然结构含量无明显影响,但过高会促使中间体生成。单独添加GSH 对复性各组分均无明显影响,单独添加GSSG 使中间体转化为聚积体;加入GSH/GSSG 促使中间体部分转化为聚积体,部分转化为天然结构。其中3mMGSH:0.3mMGSSG 时天然结构含量最大。
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