【摘 要】
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目的 构建欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗并对其免疫原性进行分析,为预防欧洲型PRRSV的感染提供依据.材料与方法 PCR扩增欧洲型蓝耳病ORF3、ORF5目的基因,将其连接到腺病毒穿
【机 构】
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吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春,130118
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会
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目的 构建欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗并对其免疫原性进行分析,为预防欧洲型PRRSV的感染提供依据.材料与方法 PCR扩增欧洲型蓝耳病ORF3、ORF5目的基因,将其连接到腺病毒穿梭质粒构建重组腺病毒穿梭质粒pacad-EU-ORF3、pacad-EU-ORF5、pacad-EU-ORF3-ORF5,将重组腺病毒穿梭质粒与骨架质粒共同转染至HEK 293细胞,构建重组腺病毒rAd-EU-ORF3、rAd-EU-ORF5、rAd-EU-ORF3-ORF5,并对构建的病毒用western blot方法进行验证.将构建的病毒免疫Balb/c小鼠,并通过特异性抗体水平及淋巴细胞增殖试验对重组腺病毒疫苗的免疫原性进行初步分析.结果与讨论 western blot结果显示重组病毒可稳定表达目的蛋白；特异性抗体检测结果显示血清中GP3蛋白抗体的OD值在35d时达到最高为0.32,是PBS组的2.3倍(P＜0.05),而GP5蛋白抗体的OD值为0.28,为PBS组的2倍(P＜0.05)；小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示重组腺病毒rAd-EU-ORF3-ORF5刺激指数为PBS组1.5倍(P＜0.05),表明重组腺病毒疫苗无论是体液免疫还是细胞免疫,均能提高机体的免疫应答水平.结论 成功包装出重组腺病毒rAd-EU-ORF3,rAd-EU-ORF5,rAd-EU-ORF3-ORF5,动物实验显示其具有良好的免疫原性.
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