梨轮纹病菌株中真菌病毒间的水平传染测定及分析

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梨轮纹病是由葡萄座腔菌[Botryosphaeria dothidea(Moug:Fr)Ces&De Not]引起的一种枝干真菌病害,除为害枝干外,叶片和果实也收到不同程度的感染及发病。近年来,轮纹病危害逐渐加重,造成重大损失,给果树产业带来严重的经济损失。研究发现,部分真菌病毒(Mycovirus)可以减弱寄主致病力,可对真菌引起的病害进行有效的防控。真菌病毒可通过感染菌株与未感染菌株的菌丝融合进行水平传播,然而菌株间的营养体不亲和性,诱导细胞发生程序性死亡是目前真菌病毒在应用中最主要的限制性因素。探索影响真菌病毒水平传播的因素及寻找传播率较高且能对致病菌株产生影响的真菌病毒显得尤为重要。本研究以分别感染产黄青霉病毒(BdCV1)LW-C、感染双分体病毒(BdPV1)LW-P、复合感染BdCV1和BdPV1的LW-1梨轮纹菌株以及无病毒感染的Mock菌株作为四组材料,在加入ZnCl2(0.75mM)的燕麦培养基上于25℃培养进行四组梨轮纹菌(LW-1/Mock、LW-C/Mock、LW-P/Mock和LW-C/LW-P)对峙培养的传毒测定,8d后选择后代衍生菌株进行dsRNA检测。结果显示,在LW-1/Mock,LW-C/Mock和LW-P/Mock对峙培养中,Mock衍生菌株的dsRNA检测表明,BdCV1+BdPV1,BdCV1,BdPV1分别传入Mock菌株中;在LW-C/LW-P对峙培养中,衍生菌株的dsRNA检测结果为LW-P衍生菌株中检测到BdPV1和BdCV1,而LW-C衍生菌株中仅检测到BdCV1,无BdPV1传入。采用RT-qPCR对LW-C/LW-P对峙培养获得的衍生菌株进行基因沉默相关基因组份进行定量分析,发现Dicer2、Argo、RdRp表达量在LW-P中均低于LW-C菌株中基因的表达量,推测BdCV1触发了LW-C寄主抗病毒的基因沉默反应,影响了病毒的水平传染效率,目前正采用基因敲除方法分析其基因沉默途径相关基因对病毒水平传播效率的影响,相关验证试验还在进一步研究中。以上结果也明确了携带BdCV1的LW-C可作为一种较好的真菌病毒供体,可为探究LW-C对其他菌株的传毒效率以及引起梨轮纹病菌致病力衰退的分子机制,为真菌病毒用于梨轮纹病害生物防治提供重要的参考依据和分子信息。
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