论文部分内容阅读
目的观察参元丹胶囊含药血清对心肌细胞缺血损伤的保护作用,并进一步观察其对微管相关蛋白LC3及自噬相关基因Beclin1-mRNA表达的影响。方法分离1～3日龄Wistar乳鼠心室肌细胞进行心肌细胞培养,采用无血清无糖培养模拟心肌缺血时营养缺乏的状态,通过培养时间长短体现不同的缺血程度,建立心肌缺血细胞模型,采用参元丹胶囊含药血清,通过MTT法、免疫荧光法及比色法观察参元丹含药血清对心肌细胞缺血模型细胞活性、细胞凋亡及细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)的影响;并进一步通过蛋白免疫印迹技术(Western Blot)逆转录PCR(RT-PCR)方法观察参元丹含药血清心肌细胞缺血模型微管相关蛋白LC3蛋白(LC3Ⅰ及LC3Ⅱ)、哺乳动物自噬相关基因Beclin1-mRNA表达的影响。结果 10%参元丹含药血清与相应时间点10%空白血清比较,能明显增加心肌缺血模型中3h、6h、18h及24h心肌细胞活性(P<0.01)、减少细胞凋亡、降低培养液上清LDH活性(P<0.05);并通过比较含药血清及空白血清LC3ⅡL/LC3Ⅰ比值发现参元丹含药血清能明显抑制缺血诱导24h时的细胞自噬活性(P<0.05),而其对心肌缺血模型各个时间点Beclin1-mRNA的表达没有影响。结论参元丹含药血清对心肌细胞缺血损伤有保护作用,并可以在心肌细缺血较长时间后抑制自噬的活性,其对自噬活性的影响可能与Beclin1自噬通路无关。