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目的建立比阿培南的LC-MS/MS检测方法,用以比阿培南在人血浆中药代动力学研究,通过血药浓度监测辅助该抗生素合理使用。方法以美罗培南为内标,血浆样本经乙腈沉淀处理后取上清进样分析。分析柱为Poroshell 120 EC-C18(4.6mm×100mm, 2.7μm)色谱柱,流动相为乙腈-水(20:80, v/v),流速0.7ml/min,柱温25℃;质谱检测采用ESI离子源,正离子MRM方式检测,比阿培南用于定量分析的离子反应为m/z 351.2→m/z 265,碰撞能:17.3eV,去簇电压:61V,内标美罗培南离子反应为m/z 384.2→m/z 141,碰撞能:23eV,去簇电压:63V,扫描时间200ms。在上述条件下进行方法学验证。结果本实验条件下,比阿培南和内标美罗培南出峰时间分别为1.45min和1.6min,峰形较好,空白血浆中内源性物质并不干扰比阿培南及内标的测定;以1/x为权重,标准曲线方程为y=0.0007x+0.00849(r=0.9968),线性良好,线性范围为25ng/ml～30μg/ml,准确度满足80%～120%;低、中、高三个浓度的日内RSD分别为18.82%、12.68%、22.76%,日间RSD分别为35.73%、31.42%、26.11%;低、中、高三个浓度的提取回收率分别为55.3%、85.2%、93.7%;低、中、高三个浓度血样4℃下存放24h的稳定性分别为93.9%、86.3%、68.78%,-20℃下存放3d的稳定性分别为104.2%、108.3%、108.9%。结论 (1)比阿培南是时间依赖性抗生素,且在血浆中含量较高,因此常采用HPLC法测定其血药浓度,该方法具有出峰时间过早,难以与杂质峰分开的问题,本实验采用液质联用方法避免了该问题且能检测到更低浓度,分析时间仅为5min,峰形及响应较好;(2)比阿培南血样在-20℃具有良好稳定性,4℃下24h稳定性差,血样处理应及时;(3)比阿培南的日内及日间精密度RSD均大于要求,且三个浓度样本回收率相差较大,这说明在样品处理过程中存在误差,应注意血样加入内标后是否混匀,另外乙腈表面张力较小,加取时操作及移液枪的准确度均需注意;(4)本实验标曲的线性范围过广,虽然线性满足要求,但无法满足精密度?回收率实验的要求,应收集临床患者血样,缩小线性范围,以保证方法准确?稳定。