【摘 要】
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[目的]研究miR-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究. [方法]采用饮水染铅方法建立大鼠发育期铅暴露模型；采用大鼠肾嗜铬细胞瘤PC12细胞和小鼠海马神经元HT22细
【机 构】
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第四军医大学军事预防医学系劳动与环境卫生学教研室
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]研究miR-34b/VAMP2通路在铅神经毒性中的作用及机制研究. [方法]采用饮水染铅方法建立大鼠发育期铅暴露模型；采用大鼠肾嗜铬细胞瘤PC12细胞和小鼠海马神经元HT22细胞建立细胞铅暴露模型；采用实时荧光定量qRT-PCR方法检测miR-34b和突触小泡膜蛋白vamp2 mRNA的表达水平；采用Western blot方法检测VAMP2蛋白的表达水平；采用荧光素酶报告基因系统检测miR-34b对vamp2 mRNA 3'-UTR区稳定性的影响；采用免疫电镜技术观察发育期铅暴露对大鼠海马CA1区突触小泡膜蛋白VAMP2表达水平的影响；采用透射电镜技术检测发育期铅暴露对大鼠海马CA1区突触囊泡形成的影响. [结果]铅暴露组大鼠海马组织中miR-34b表达量均高于对照组,差异具有统计学意义(p＜0.01),且高剂量暴露组高于低剂量暴露组,差异具有统计学意义(p＜0.05).铅暴露还影响PC12细胞和HT22细胞中miR-34b的表达,且表达水平随着染铅剂量的增加而升高(p＜0.05).采用生物信息学方法对miR-34b的靶基因进行分析,结果显示突触小泡膜蛋白VAMP2作为miR-34b靶分子的可能性较大.向PC12细胞中转染miR-34b的抑制剂,突触小泡膜蛋白VAMP2 mRNA和蛋白表达水平显著升高.荧光素酶报告基因系统检测显示,miR-34b能够与vamp2 mRNA的3'-UTR区特异结合影响其稳定性.铅暴露组大鼠海马组织中VAMP2 mRNA和蛋白表达水平较对照组下降.与对照组相比,PC12细胞和HT22细胞处理24h和48h后,VAMP2 mRNA和蛋白表达水平下降.免疫电镜方法检测结果显示,发育期铅暴露后海马区突触结构内VAMP2蛋白表达显著下调；透射电镜检测结果显示,发育期铅暴露能够显著减少大鼠海马区神经元内突触囊泡的数量.[结论]铅暴露通过诱导miR-34b表达进而影响下游靶分子突触小泡膜蛋白VAMP2的表达以及海马区神经元内突触囊泡的形成.
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