高效液相色谱法测定大鼠坐骨神经中山梨醇的方法学考察

来源 :首都医科大学第二届北京中医药研究生学术论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:byekao
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  目的 采用先进的技术手段准确测定坐骨神经中山梨醇含量有利于研究糖尿病周围神经病变的发生与发展.方法 采用HPLC检测大鼠坐骨神经样品,以鼠李糖为内标.色谱柱为Angilent ZORBAX SB C18(4.6×250 mm,5μm),乙腈-水(70∶30)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;检测波长228 nm;柱温25℃.结果 山梨醇在坐骨神经匀浆中浓度在7.5~600 nmol·mL-1线性关系良好(R2=0.999 9),最低定量限为7.5 nmol·mL-1.在山梨醇坐骨神经匀浆摩尔浓度为15,150,600 nmol·mL-i时,日内、日间精密度小于10%,回收率较高,满足生物样品回收率在80~120%的范围,相对标准偏差均小于9%;稳定性好,反复冻融3次、室温放置4h、-20℃冻存28 d以及处理好样本于进样器放置24 h的RSD均<10%.本法的稳定性、精密度、回收率、专属性和定量线性范围均达到了体内药物分析的要求.结论经过系统的方法学考察,该研究所建立的测定方法灵敏度较高、重复性良好,可为探讨糖尿病周围神经病交的山梨醇通路发病机制奠定基础.
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