药用野生稻NAC转录因子基因的克隆及其功能研究

来源 :广东省遗传学会第九届代表大会暨学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:A88851258
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  野生稻携带多种生物和非生物胁迫的抗(耐)性基因,是水稻遗传改良的重要基因库.NAC转录因子是植物特有的转录因子,在防卫反应和逆境胁迫应答中起重要的作用.对药用野生稻(Oryza officinalis,CC染色体组)幼苗进行20%PEG模拟干旱处理,提取处理组与未处理组RNA,进行高通量转录普测序和差异基因表达分析,从分析结果中筛选出2个表达显著差异的NAC家族预测基因,分别命名为OoNA C1和OoNAC2.进一步设计引物,以药用野生稻cDNA为模板,扩增出目的基因完整CDS,测序结果表明,OoNAC1和OoNAC2完整的开放阅读框(ORF)长度分别为738bp和552bp,分别编码245和183个氨基酸残基,OoNAC1编码区长度为1334bp,包含了3个外显子和2个内含子.通过转录激活活性验证、原核表达等实验对OoNAC1进行功能研究.酵母单杂滤纸显色反应结果表明Oo NA C1转录因子能激活下游报告基因(His和LacZ)的表达,具有转录激活功能,β-半乳糖苷酶活性检测法定量分析得出OoNAC1的半乳糖苷酶活性为21.94 U.将OoNAC1完整的CDS融合到原核表达载体pET-28a+,经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,OoNAC1蛋白分子量约为43 KD,且在IPTG终浓度为0.8 mM/L时诱导蛋白表大量最大.为进一步了解OoNAC1在生物体胁迫响应的作用,用大肠杆菌BL21 (DE3)菌株分别进行400 mM NaC1和600 mM NaC1胁迫处理,与对照菌株相比,表达OoNAC1的菌株能够更好的耐受高浓度的NaC1,表明OoNAC1对盐胁迫有一定的响应能力,能够保护细胞免受高盐的毒害.
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