【摘 要】
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疯牛病是一种严重危害动物和人健康的疾病,其病原朊病毒可以通过食物链进行传播,因此建立准确的检测牛源性成分的方法非常重要.我们采用常规PCR和Real-time PCR中的TaqMan技术建立了快速鉴定牛源性成分的方法,使用Chelex-100提取肉骨粉中的DNA,过程简单可靠仅需要20分钟左右,对不同含量的牛肉骨粉进行检测,常规PCR能够检测到的最低含量是0.001﹪,用Real-time PCR
【机 构】
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农业部动物检疫所国家外来动物疾病诊断中心(山东青岛);扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室(江苏扬州)
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疯牛病是一种严重危害动物和人健康的疾病,其病原朊病毒可以通过食物链进行传播,因此建立准确的检测牛源性成分的方法非常重要.我们采用常规PCR和Real-time PCR中的TaqMan技术建立了快速鉴定牛源性成分的方法,使用Chelex-100提取肉骨粉中的DNA,过程简单可靠仅需要20分钟左右,对不同含量的牛肉骨粉进行检测,常规PCR能够检测到的最低含量是0.001﹪,用Real-time PCR对相同的样品进行检测所得到的灵敏度更高,可达到0.0001﹪,两种PCR方法的鉴定过程都非常简单快速,各需要2个小时左右.这两种方法可以根据各实验室的不同条件作为肉骨粉鉴别的常规检测方法.
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为临床能快速诊断虎源流感,通过对本室分离获得的4株虎源流感病毒的HA和NA基因序列分析,结合GenBank中报道的A型流感病毒HA、NA、NP序列,选择保守序列区作为扩增区域.利用Primer5.0软件设计出各个基因的特异性引物,扩增片段大小分别为581bp、173bp、464bp.首先建立三个基因各自的单项RT-PCR检测方法,并用琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶酶切和PCR产物回收纯化后DNA序列
将本实验室分离、鉴定并纯化的虎源HN流感病毒(TIV)接种鸡胚尿囊腔,收获鸡胚尿囊液和羊水.将该病毒尿囊液10倍倍比稀释至10,乙醚麻醉后每个稀释度接种小鼠10只.通过记录各组小鼠死亡数、观察临床症状、测量体重变化、观察病理变化、血液学分析、HI抗体检测及病毒分离鉴定等指标来评价TIV对小鼠的感染性,并计算TIV对小鼠的半数致死量.结果显示:1.发病和死亡小鼠均表现精神沉郁、被毛逆立、眼睛有粘性分
猴痘又称猴天花,与人的天花是近亲,通常发生在非洲热带草原.这种疾病正在美国扩散,引起了政府的高度重视.如此病得不到有效控制,不仅那些买卖外来宠物的人受到威胁,美国全国的公共卫生也会遭到威胁.美国公共卫生人员正在积极进行研究,严防猴痘大规模传染.
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