乙肝病毒表面抗原类病毒颗粒在层析中的结构变化

来源 :全国生物颗粒与粉体制备、应用技术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:keyina
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目的:乙肝病毒表面抗原(HBsAg)是乙肝疫苗的有效成分,其在纯化过程中损失较大,本论文考察其在层析中究竟发生了哪些结构变化,为提高其在层析中的收率以及保持其免疫原性提供指导。方法:将HBsAg上到DEAESepharose FF柱上,让这种类病毒颗粒吸附一定时间后再洗脱下来,然后通过圆二色谱(CD),凝胶过滤高效液相(HPSEC)以及多角度激光散射检测器(MALLS)检测其二级结构和四级结构的变化。 通过将其HPSEC上的峰面积与在DEAE表面上的接触时间作图,得到HBsAg的柱上解聚速率。结果:与微米球相比,纳米球可以被APCs快速的摄取,表现出最大的内吞数量及颗粒表面积。此外,颗粒的胞内运输方式具有显著的粒径依赖性,纳米颗粒有助于提高溶酶体加工、酶解抗原的能力,并且上调了利于抗原提呈,T细胞活化的细胞因子分泌水平。结论:发现HBsAg在DEAE表面中会发生明显的解聚。解聚以后,其二级结构也会发生明显的变化。研究测定了HBsAg的柱上解聚动力学,在5℃时,其解聚速率为5.52×10-4 sec-1,解聚反应活化能为128kJ/mol。
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目的:粒径大小是微观颗粒最重要的性质之一,本论文通过考察粒径大小对免疫学效应的调节作用,期待能为纳微球佐剂的设计提供新的理念和思路。方法:采用SPG膜乳化技术制备出不同粒径大小的壳聚糖纳微球作为颗粒模型,并选用专职抗原提呈细胞(APCs)巨噬细胞株J774A.1,考察了粒径对免疫学效应的影响。结果:与微米球相比,纳米球可以被APCs快速的摄取,表现出最大的内吞数量及颗粒表面积。此外,颗粒的胞内运输
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@@质谱技术具有分析速度快、样品需求量少和准确度高等优点,电喷雾技术(ESI)和基质辅助激光解析电离技术(MALDI)的出现使生物质谱技术逐渐成为生物大分子研究领域中必不可少的分析手段,在蛋白质或多肽序列分析、翻译后修饰分析、生物大分子之间的相会作用以及疾病早期诊断中标志物的快速检测等中的应用日益广泛。在质谱分析过程中,不同蛋白质或多肽的离子化效率存在差异且受样品基质影响,因此样品预处理过程十分关