【摘 要】
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目的 凋亡是机体抵御病原体侵入、致病的重要调节防御机制.实验通过人重组干扰素-γ(recombinant human IFN-γ,rhIFN-γ)诱导鹦鹉热嗜衣原体(Chlamyidopila psittaci,Cps)持续性感染HeLa细胞,研究宿主细胞凋亡抑制作用产生机制,监测宿主细胞凋亡相关蛋白表达情况以及凋亡信号通路,并初步了解Cps持续性感染抑制凋亡相关途径.因此,该实验对探索Cps抑制
【机 构】
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南华大学医学院病原生物学研究所,湖南省分子靶标新药研究协同创新中心,湖南省特殊病原体重点实验室,衡阳421001
【出 处】
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21世纪第五届全国人兽共患病学术研讨会
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目的 凋亡是机体抵御病原体侵入、致病的重要调节防御机制.实验通过人重组干扰素-γ(recombinant human IFN-γ,rhIFN-γ)诱导鹦鹉热嗜衣原体(Chlamyidopila psittaci,Cps)持续性感染HeLa细胞,研究宿主细胞凋亡抑制作用产生机制,监测宿主细胞凋亡相关蛋白表达情况以及凋亡信号通路,并初步了解Cps持续性感染抑制凋亡相关途径.因此,该实验对探索Cps抑制宿主细胞凋亡以及逃避宿主免疫机制具有重要指导意义.方法 培养HeLa细胞,单层细胞用于培养Cps 6BC标准菌株,感染过程向培养基中加入35ng/mL rhIFN-γ诱导Cps 6BC持续性感染,分别感染4、8、12、24 h后收集样本进行Hochest33258、TUNEL荧光染色,并利用间接免疫荧光染色法(indirect immunofluorescence assay,IFA),通过观察HeLa细胞核以及DNA碎片情况检测HeLa细胞凋亡情况.检测细胞色素C(Cytochrome C,Cyt.C),线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP),利用免疫印迹分析技术(Western blot)检测HeLa细胞中Fas、Fas-L、Caspase 8、Cyt.C、tBid、Bad、Bim、Mcl-1、MAPK/ERK的表达水平. 结果 (1) Cps6BC持续性感染HeLa细胞凋亡抑制现象随感染时间增加愈加明显,且引起宿主细胞裂解的Caspase 3表达下调.(2)抗凋亡相关蛋白Mcl-1的表达水平随时间呈递增趋势,而促凋亡蛋白Bad的表达水平随Cps6BC持续性感染时间增长表达无显著差异.(3)线粒体途径中Cyt.C的表达水平随时间呈递减趋势,线粒体膜电位下降受到抑制.(4)宿主细胞凋亡相关蛋白Bim、tBid表达随时间呈递减趋势,而下调的Bim、tBid引起线粒体Cyt.C的表达水平下调.(5)宿主细胞凋亡受体途径中FAS、Fas-L、Caspase 8的表达水平随时间呈递减趋势,宿主细胞凋亡受体途径受到抑制.(6) Cps 6BC持续性感染抑制宿主细胞凋亡作用受到MAPK/ERK信号转导通路的调控.结论 Cps 6BC持续性感染能通过过表达抗凋亡蛋白Mcl-1,低表达促凋亡蛋白tBid、Bim,抑制线粒体细胞色素C释放,抑制宿主细胞线粒体膜电位减低,上调p-ERK1/2来抑制宿主细胞凋亡.
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