【摘 要】
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目的 研究Disulfirum(DS)联合Cu(DS/Cu)对B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞株(nalm6细胞)增殖及凋亡的影响及其机制的探讨.方法 CCK8法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6的增殖抑制作用；Annexin-V/PI法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6细胞的诱导凋亡作用；JC-1法检测不同浓度DS/Cu处理nalm6后线粒体膜电位的变化；蛋白质印迹法检测药物处理后线粒体通路相
【机 构】
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南方医科大学南方医院血液科 中国科学院广州生物医院与健康研究院再生生物学重点实验室
【出 处】
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广东省医学会第十九次血液病学学术会议
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目的 研究Disulfirum(DS)联合Cu(DS/Cu)对B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞株(nalm6细胞)增殖及凋亡的影响及其机制的探讨.方法 CCK8法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6的增殖抑制作用；Annexin-V/PI法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6细胞的诱导凋亡作用；JC-1法检测不同浓度DS/Cu处理nalm6后线粒体膜电位的变化；蛋白质印迹法检测药物处理后线粒体通路相关蛋白(Bcl2及Bcl-xl)的表达变化.结果 0.5umol/L Cu作用24h后对nalm6细胞的增殖抑制率为(6.39±4.93)％,与对照组比较差异无统计学意义(t=-2.244,P=0.154),而不同浓度的(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4umol/L)DS联合0.5umol/L Cu对nalm6细胞均具有显著的增殖抑制作用,抑制率分别为(22.29±6.69)％、(48.66±11.58)％、(50.83±12.61)％、(59.24±9.43)％、(62.74±9.17)％、(66.7±7.63)％、(72.13±7.94)％、(77.86±5.43)％,与对照组比较差异均具有统计学意义(均P＜0.05),24h的IC50为(0.18±0.08) umol/L.Annexin V/PI检测细胞凋亡的结果显示0.5umol/L Cu作用24h后nalm6细胞的凋亡比例为(7.82±5.13)％,与对照组(8.34±6.23)％比较差异无统计学意义(t=0.112,P=0.916),而不同浓度的DS/Cu对nalm6细胞均具有显著的诱导凋亡作用,0.025、0.05、0.1、0.2、0.5umol/L的DS联合Cu(0.5umol/L)作用24h后的凋亡比例分别为(17.84±7.68)％、(31.39±5.86)％、(60.41±13.87)％、(69.26±13.29)％、(81.37±12.72)％,与对照组比较差异具有统计学意义(均P＜0.05).JC-1法检测线粒体膜电位变化的结果显示单药Cu(0.5uM)组的JC-1多聚体/单体比值为(1.12±0.09),与对照组(0.90±0.13)比较差异无统计学意义(t=-2.442,P=0.071),而不同浓度的(0.025、0.05、0.1、0.2、0.5 umol/L) DS联合0.5 umol/L Cu组处理nalm6细胞12h后线粒体膜电位水平明显降低,表现为JC-1多聚体/单体比值随浓度的增加而逐渐降低,具体比值分别为：(1.4±0.32)、(0.32±0.13)、(0.14±0.09)、(0.1±0.02)、(0.06±0.005),与对照组比较差异均具有明显统计学意义(均p＜0.05).蛋白质印迹法显示DS/Cu处理nalm6细胞12h后能下调Bcl2及Bcl-xl蛋白的表达.结论 DS/Cu对BALL具有增殖抑制及诱导其凋亡的作用,其作用机制可能是通过线粒体通路实现的.
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