猪戊型肝炎病毒ORF2基因真核表达质粒的构建

来源 :广西兽医协会、广西畜牧兽医学会畜禽传染病学分会2017年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:stillzhl
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戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的病毒性肝炎,以水源性暴发和急性散发为特点,主要通过粪-口途径传播,是一种新发重要人兽共患传染病,呈全球分布,严重危害人们身体健康和动物养殖业健康发展,是发展中国家的主要公共卫生问题之一.很多研究及病例证明了HE是一种可以通过食物或水源环境传播的人兽共患疫病,猪是HEV的重要储库.HEV编码病毒衣壳蛋白pORF2有多个重要免疫抗原表位,目前HEV基因工程疫苗的研究主要集中在ORF2,且对ORF2的研究主要集中在C端,有关ORF2N端及中间部分的研究报道甚少.对ORF2不同区域进行研究,筛选反应原性好、免疫原性高的抗原片段,对于HEV基因工程疫苗的研发具有重要意义.本研究将广西HEV地方毒株ORF2三个连续片段的PCR产物克隆于CMV启动子高效表达的载体中,成功获得三个真核表达质粒pEASY-LB1、pEASY-LB2、pEASY-LB3。重组真核表达质粒分别转染293T细胞,经实时荧光定量PCR检测证实pEASY-LB1, pEASY-LB2,pEASY-LB3已分别在293T细胞中转染成功。经Western-Blot证实构建的pEASY-LB1,pEASY-LB2, pEASY-LB3具生物学活性。HEV ORF2三个真核表达质粒构建为后期动物免疫试验及深入研究猪戊型肝炎基因工程疫苗奠定了基础。
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