流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的一种人、禽、畜共患的急性传染病，它以高发病率、严重并发症而成为严重威胁人类健康的疾病。特别是新近爆发的高致死率禽流感和A型H1N1病毒引发的流感大流行，更是造成全世界范围内的恐慌。临床上批准使用的抗流感药物主要有金刚烷胺类化合物和神经氨酸酶抑制剂两大类。由于这些药物主要针对病毒颗粒中变异性较强的靶点，使得病毒总是能很快适应并产生耐药性，同时这些药物还存在毒副作用大等问题。因此，亟待寻找新的抗流感病毒药物靶标，发展新型抗病毒药物。流感病毒的基因组依赖其RNA聚合酶的作用进行复制和转录，进而形成病毒颗粒。病毒的RNA聚合酶是由病毒编码的PB1，PB2和PA三个亚基结合组成，同时必须与核蛋白NP结合成复合物后，才能起始病毒基因组的复制和转录。流感病毒RNA聚合酶复合物因其重要功能、机制特殊、高度保守、同源性高等特点，而成为极具发展潜力的药物靶标。由于流感病毒RNA聚合酶作用机制非常复杂，其中不仅涉及多个病毒蛋白，还需要宿主协同因子的参与。这一复杂的催化机制极大地制约了酶活分析方法的发展，直接影响了以RNA聚合酶为靶点的药物的筛选和研发。在本研究中，我们构建了流感病毒RNA聚合酶活性依赖的海肾荧光素酶(Renilla luciferase，简称RLuc)表达载体，并验证了共表达流感病毒RNA聚合酶PA、PB1、PB2亚基和NP蛋白，可以高效诱导RLuc的表达。在荧光素酶底物存在的情况下，通过测定荧光强度，可以定量分析流感病毒RNA聚合酶活性。当上述构成RNA聚合酶复合物的四种病毒蛋白任缺其一，则荧光信号消失。这一结果表明RLuc的表达完全依赖于流感病毒RNA聚合酶复合物的形成。随后，我们通过调整质粒的转染用量，研究各种病毒蛋白的表达水平对该分析系统的影响，进而确定了酶活分析的优化条件。综上所述，该流感病毒RNA聚合酶活性分析方法简便可靠、灵敏特异。可以用于以流感病毒RNA聚合酶为靶点的抗流感病毒药物筛选和药效学评价。