丙肝病毒侵入细胞需CD81和清道夫受体SR-B1等共受体

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目的利用构建的展示HCV包膜蛋白E1E2的假型炳毒颗粒(HCVpp)对细胞表面CD81和清道夫受体SR-B1等共受体在HCV侵入细胞进行探讨。方法用磷酸钙转染法将编码HCVE1E2糖原蛋白和反转录病毒病毒核心蛋白的表达载体及编码绿色荧光蛋白。并具有包装功能的反转录病毒转移载体共转染293T人胚肾上皮细胞,24h后回收含HCVpp的上清液用于细胞感染试验,同时构建MLV-App等假型病毒颗粒用于对照。此外,用表达载体及含hCV81基因的反转录病毒载体建立了若干膜表达SR-Bl和(或)JhCD81分子的转染细胞,将含HCVpp上清液稀释后,分别加至含上述细胞生长的培养皿中,测定病毒感染滴度,即每毫升上清液中病毒转导单位,采用FACS法检测可溶性HCVE2蛋白与细胞的结合作用,并用抗SR-Bl血清进行细胞结合抑制试验。结果1.HCVpp的细胞侵入具有PH依赖性,用抑制胞质酸化的药物处理细胞,可降低HCVpp对Huh-7细胞的感染性,并具有剂量反应关系,用弱碱性药物氯喹处理,也观察到类似结果。2.细胞共表达hCD81和SR-Bl还不足以介导HCVpp侵入细胞。进一步观察发现一些非肝组织来源的人癌细胞系,如Hela细胞膜表面表达CD81和SR-B1的水平与人肝癌细胞系相比无明显差别,但HCVpp对其感染作用明显低于对肝组织细胞的感染,提示肝细胞的某些成分在HCVpp侵入细胞并建立感染过程中是必需的。3.SR-B1和CD81均涉及HCVpp侵入肝细胞,当人肝癌细胞HepG2(天然不表达CD81)经基因转染在细胞膜表面表达Hcd81时,HCVpp对其感染作用提高约100倍,CD81和SR-Bl在介导HCVpp侵入肝细胞中起重要作用,推测SR-Bl、CD81和(或)LDLr相互间可能形成HCV受体复合物而共同起作用关系。结论可被HCVpp感染的细胞,其共同特征是共表达CD81、LDLr和SR-B1的肝源性细胞,一些非肝组织来源的细胞虽表达上述3种细胞表面分子,却不能被HCVpp感染或对HCVpp的受纳能力很低。本义指出,肝细胞作为HCV感染的主要靶细胞,在被HCV感染的初期阶段,除HCV受体外,尚需要某些肝特异性因子/分子的参与,因此有必要对这些肝细胞因子/分子的性及特征作进一步研究。
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