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目的：构建B19病毒VPlu基因真核表达载体免疫动物,观察鼠心肌组织病理、鼠脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞分子数量、鼠血清中抗体产生,判断其作为核酸疫苗的可能性。方法：构建重组pIRES2-EGFP-VPlu真核表达载体,转染及蛋白表达鉴定,将重组载体pIRES2-EGFP-VPlu及pIRES2-EGFP空质粒及生理盐水分别采用肌肉注射的方法免疫BABL/c小鼠。通过流式细胞术双标法检测小鼠脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞数量,western blot及ELISA方法检测小鼠血清中B19VPlu抗体,并对免疫后小鼠心肌组织行光镜和电镜检查,观察和分析免疫动物的反应。结果：构建的B19病毒XA株pIRES2-EGFP-VPlu真核表达载体,经酶切鉴定,基因测序证明目的基因全长480bp,没有产生碱基突变；经过真核转染重组质粒pIRES2-EGFP-VPlu至HeLa细胞,荧光显微镜及Western blot检测证实,重组质粒pIRES2-EGFP-VPlu转染后的HeLa细胞可表达相对分子量为20KD的目的蛋白VPlu。而质粒pIRES2-EGFP转染的HeLa细胞以及正常HeLa细胞均未见特异性的目的蛋白表达。重组质粒免疫的BABL/c小鼠脾脏CD4+T细胞在第2、3个月比盐水组分别增长6.2%、5.0%,(P<0.05,n=3)。第4个月后CD4+T细胞逐渐回复正常,而CD8+分子未产生明显变化。ELISA检测体系可检测到特异的抗B19病毒VPlu抗体。小鼠血清稀释倍数在1：1000与VPlu蛋白显示了良好的结合活性。小鼠心肌组织经光镜及电镜检查未提示病理变化。结论：本实验成功构建了B19病毒XA株pIRES2-EGFP-VPlu真核表达载体,体外实验证实其可在Hela细胞中表达VPlu蛋白。免疫BALB/c小鼠后,经ELISA检测能产生特异性抗体,心肌组织经光镜和电镜检查未发现病理变化,提示重组质粒免疫动物后未引起自身免疫紊乱。