【摘 要】
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本研究旨在构建稳定分泌表达LLO-E7融合蛋白的重组减毒单增李斯特菌,并分析重组菌诱导的免疫应答能力.首先,利用同源重组技术将人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原定点整合至单增李斯特菌基因组,然后Western blot分析重组菌的E7表达,最后通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)、细胞毒性T淋巴细胞杀伤试验及酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定重组减毒单增李斯特菌诱导的特异性免疫应答.结果显示
【机 构】
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扬州大学,江苏省人兽共患病学重点试验室,江苏扬州225009;河南科技大学,动物疫病与公共安全重点实验室 河南洛阳471003
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会第八届会员代表大会暨2013年学术研讨会
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本研究旨在构建稳定分泌表达LLO-E7融合蛋白的重组减毒单增李斯特菌,并分析重组菌诱导的免疫应答能力.首先,利用同源重组技术将人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原定点整合至单增李斯特菌基因组,然后Western blot分析重组菌的E7表达,最后通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)、细胞毒性T淋巴细胞杀伤试验及酶联免疫吸附试验(ELISA)来测定重组减毒单增李斯特菌诱导的特异性免疫应答.结果显示,构建的重组菌能够稳定分泌表达具有活性的LLO-E7融合蛋白;ELISPOT结果表明,重组菌LM4△hly::E7以诱发Thl型免疫为主;同时LM4Δhly::E7能够诱导强烈的特异性CTL杀伤活性,杀伤率可达到72％,与对照组相比,差异极显著(P＜0.01);ELISA检测LM4hly::E7免疫小鼠血清中的E7抗体效价为1∶400.以上研究结果表明重组减毒菌LM4Δhly::E7能够诱导机体产生E7特异性的细胞免疫应答和体液免疫应答,同时显示出减毒李斯特菌作为疫苗载体具有广阔的应用前景.
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