手足口病主要由EV-A71和CV-A16肠病毒引起,而近年来由CV-A10、CV-A6、CV-B3等肠道病毒引起的病例越来越多。手足口病暴发疫情日益复杂,往往伴随着多种肠道病毒的流行,对人类健康和经济造成巨大威胁。尽管目前已上市了EV-A71和CV-A16疫苗,并且一些多价肠道病毒疫苗也正在开发,但消除肠道病毒对人类生命健康的威胁仍然是一个巨大的挑战,如灭活EV-A71疫苗对其他肠道病毒的感染没有保护力。我们根据合成肽疫苗的原理,利用免疫信息学设计了一种针对EVA71、CV-A16、CV-A10、CV-A6、CVB3高效、安全的多价抗原表位疫苗。通过分析五种肠病毒株的蛋白质序列,筛选出高度保守且免疫原性强,对宿主无毒性作用的B细胞、HTL、CTL细胞抗原表位,进一步的分析确认了可以诱导IFN-γ以及IL-4非诱导型的HTL细胞抗原表位和T细胞表位相关MHC分子等位基因对应的人口覆盖率。多价肠道病毒疫苗的构建以通过合适的连接子将50s核糖体蛋白L7/L12佐剂和候选抗原表位按顺序连接,接着评估分析了构建疫苗的抗原性、过敏原性和物理学特性。对蛋白质疫苗二级结构分析及三级结构同源建模、二硫键设计、重修和验证后分析确定了蛋白质疫苗的构象B细胞表位。与TLR4分子对接检验了配体和受体的稳定性。最后,计算机模拟克隆将疫苗的基因序列用p ET28a(+)构建表达载体以保证疫苗高效表达。本研究提供了一种经济、省时的方法来设计一种基于多价抗原表位的肠道病毒疫苗,该疫苗可以同时诱导多个级别的免疫反应,并对多种肠道病毒病原体提供保护。