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目的:前期研究结果显示含黄酮类中药芫花和了哥王在Bhas 42细胞转化实验中呈非遗传毒性致癌性阳性,本实验针对潜在氧化应激作用对其非遗传毒性致癌性的可能作用机制进行深入研究。方法:(1)芫花和了和哥王粗提物分别经10倍体积乙醇(95%)浸泡后提取,其冻干粉作为受试物。研究选取芫花(0.5、1、5μg/mL)和了哥王(0.5、1、5μg/mL)可诱导Bhas 42细胞转化的三个浓度,同时设置DMSO阴性对照组平行开展实验。(2)受试物对Bhas 42细胞内ROS含量的影响:Bhas 42细胞与受试物作用72h后,经DCFH-DA和Hochest 33342染色30min,PBS清洗后用5%乙醇固定,并使用高内涵In cell2000检测分析细胞内ROS的变化水平;(3)受试物对Bhas 42细胞内Ca2+的含量的影响:Bhas 42细胞与受试物作用24h后,经Fluo-4 AM和Hochest 33342染色30 min,PBS清洗后用5%乙醇固定,并使用高内涵检测分析细胞内ROS及Ca2+的变化水平;(4)受试物对Bhas 42细胞内SOD及MDA含量的影响:Bhas 42细胞与受试物作用72 h后收获细胞并裂解处理,收集细胞裂解上清液用于ELISA法检测细胞内SOD和MDA的含量。以上所得数据用one-way ANOVA(双侧Dunnett-t检验)进行统计分析。结果:(1)ROS水平:受试物处理72h后,与DMSO组(1±5.91%)相比,芫花的三个剂量组0.5、1、5μg/mL(2.07±21.33%、2.25±13.18%、2.56±4.47%)和了哥王三个剂量组0.5、1、5μg/mL(2.45±13.96%、2.49±14.58%、2.80±11.07%)的ROS含量明显增加(P<0.05),且与剂量正相关。(2)Ca2+水平:受试物处理72h后,与DMSO组(1±5.75%)相比,芫花的三个剂量组0.5、1、5μg/mL(1.11±7.13%、1.21±0.86%、1.33±6.76%)细胞内Ca2+的含量均有增加(P<0.05),且与剂量有关;了哥王三个剂量组0.5、1、5μg/mL(1.13±1.54%、1.11±5.46%、1.10±7.27%)细胞内Ca2+的含量略有增加,但无显著性差异(P>0.05)。(3)SOD水平:与DMSO组(0.479ng/mL±1.4%)比较,芫花组三个剂量组(0.407ng/mL±3.67%、0.405ng/mL±1.65%、0.408ng/mL±1.87%)和了哥王三个剂量组(0.358ng/mL±1.24%、0.372ng/mL±0.925%、O.400ng/mL±1.12%)细胞内SOD浓度呈显著性降低(P<0.05)。(4)MDA水平:与DMSO组(213.954ng/mL±26.488)比较,芫花组三个剂量组(291.500ng/mL±41.550、420.453ng/mL±71.441、545.448ng/mL±26.267和了哥王三个剂量组(337.609ng/mL±43.091、336.303ng/mL±32.537、407.489ng/mL±39.037)细胞内DMA浓度呈显著性升高(P<0.05)。结论:在诱导Bhas42细胞发生转化的浓度条件下,含黄酮类中药芫花和了哥王均可促进细胞内ROS的含量增加、降低SOD含量并升高MDA含量;其中芫花可促进Bhas 42细胞内钙超载,而了哥王对细胞内Ca2+水平无显著性影响,提示钙超载可能不是了哥王诱导氧化应激并促进自由基生成的方式。综上,氧化应激作用机制在中药芫花和了哥王诱导Bhas 42细胞转化,并发挥非遗传毒性致癌性作用中扮演重要角色。