慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠

来源 :第九届中南地区实验动物科技交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:reap
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:基于慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠以建立基于该转基因方法制作转基因小鼠的技术平台。 方法:将携带mRFP基因的慢病毒注射入ICR小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代小鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP 转基因鼠。 结果:移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2 只假孕母鼠,共获得仔鼠6 只;利用体视荧光显微镜检测mRFP 表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2 只(R3和R4) 鼠耳和胡须高表达mRFP,其余的弱表达mRFP(R1、R2和R5)或荧光强度(R6)与野生型ICR小鼠无明显差别,而DNA 水平检测证实,6 只F0代中,5 只(R1、R2、R3、R4和R5)基因组中整合有外 源转基因hUbmRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果。 结论:本实验室建立 了基于慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉(RNAi),并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础。
其他文献
The identification and analysis of tissue specificity of genes and gene expressions have a direct and profound impacton the further understanding of a wide array of problems of much significance.Despi
Background: With the avalanche of protein sequences generated in the post-genome era, it is very important to develop computational methods for fast annotating the subnuclear locations for numerous no
Background: it is increasingly recognized that gene-gene interaction is an important genetic component for complex diseases.Although several metrics for detecting gene-gene interactions have been deve
Background: Bone morphogenetic protein 4 (BMP4), a member of the transforming growth factor β family, is involved in a variety of developmental processes including heart, central nervous system, carti
目的:探究甲醛吸入性急性肺水肿模型大鼠心、肺、脑、肝、肾和血清总抗氧化能力(TAOC)的变化规律,为研究此类肺水肿机制提供实验依据。方法:健康成年SD大鼠18只随机分对 照组和模型组,按文献在染毒箱内以“静态+喷雾”吸入甲醛2h复制急性肺水肿模型,8h后眼球采血并处死,取心、肺、脑、肝、肾等组织以液氮速冻再转-80℃冰箱保存,按试剂盒操作测定血清及心、肺、脑、肝、肾等匀浆组织TAOC,同时计算成模
目的:观察加味四君子汤对改善大鼠胃黏膜免疫功能的作用。方法:Wistar鼠,雄性,220g~330g,灌胃给药阿司匹林300mg/kg,5小时之后即可[1],以胃粘膜出现溃疡为造模成功。将40只大鼠随机分为4 组,分别为空白对照组(等量生理盐水)、自然恢复组(等量生理盐水)、加味四君子汤组(1.5ml/100g/d,3d)和思密达组(0.6g/d/kg,5d)。给药完成后,采集标本,进行胃黏液中N
目的:借助慢病毒将EGFP基因导入西藏小型猪胎儿成纤维细胞(Porcine embryonic fibroblasts,PEFs),以基于PEFs建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法:取35天西藏小型猪胚胎,酶消化法分离培养西藏小型猪的PEFs,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染),随后用病毒上清感染PEFs,24~48h后荧光显
目的:建立家禽前脂肪细胞的原代培养方法,初步探索不同脂肪来源的前脂肪细胞生长差异。方法:用胶原酶消化法分离细胞,用地塞米松、胰岛素诱导分化,油红O染色鉴定,MTT 法检 测鸡和鸭的皮下及腹部的前脂肪细胞增殖情况。结果:培养期间,细胞由梭形逐渐变圆增大,油红O染色呈橘色,表明所获细胞为未分化的前脂肪细胞。鸡和鸭的皮下及腹部的前脂肪细胞的增殖有所差异。结论:本研究建立了家禽皮下和腹部前脂肪细胞的分离培
目的:观察六月青总皂苷(the terpenoids of Liuyueqing,TLYQ)体内抗鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)的作用。方法:将DHBV DNA阳性麻鸭随机分为六月青总皂苷大、中、小剂量治疗组、拉米夫定组和模型组,分别给予相应药物进行干预。用药前、用药第7、14d,及停药第7d,取静脉血用实时荧光定量PCR法检测血清DHBV DNA含量。治
目的:针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法:⑴按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体 介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT 细胞,24~48 h 后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产;⑵将携带EGFP基因的病毒上清或 浓缩后的病毒分别加