【摘 要】
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近两年在我国爆发的仔猪腹泻疫情对养猪业造成了重大的影响,为了深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(P
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2013年学术年会
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近两年在我国爆发的仔猪腹泻疫情对养猪业造成了重大的影响,为了深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行了检测,结果显示总阳性率为81.7％.进一步从部分样品中,对PEDV的N基因进行了克隆和序列分析,结果显示采集的临床样品中各分离株之间的氨基酸同源性高达99％以上,与代表性病毒株CV777的氨基酸同源性为97.4％～98.1％,表明目前流行的PEDV其N基因仍然是相对保守的.同时,我们选择将ZZ-1株的N基因克隆至原核表达载体pGEX-6p-l,构建了重组表达载体pGEX-N,经诱导表达和SDS-PAGE电泳,结果显示该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为81ku、,利用PEDV阳性猪血清对重组N蛋白进行western blot分析,结果表明该重组蛋白能够被PEDV阳性猪血清特异性识别.我们将纯化后的重组N蛋白作为包被抗原,对20份已知背景的临床猪血清抗体进行ELISA检测.结果显示有9份血清为抗体阳性,11份血清呈抗体阴性,与应用RT-PCR方法鉴定抗原的结果符合率为85％.本研究表明我们表达的重组N蛋白具有良好的抗原性,可以将其作为PEDV血清学诊断的候选抗原.
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