【摘 要】
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根据传染性法氏囊病病毒保守序列vp3基因,设计引物用于建立RT-LAMP检测方法.本文通过对Bastaine,dNTP,模板RNA,引物,MgSO4及反应温度等条件进行优化,实现传染性法氏囊病病毒在60℃1h15min;80℃10min下目标核酸区段大量扩增,成功建立针对鸡传染性法氏囊病病毒的环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法.并对所建立的RT-LAMP检测方法进行灵敏性和特异性试验,结果表
【机 构】
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山西省农业科学院畜牧兽医研究所,山西太原030032
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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根据传染性法氏囊病病毒保守序列vp3基因,设计引物用于建立RT-LAMP检测方法.本文通过对Bastaine,dNTP,模板RNA,引物,MgSO4及反应温度等条件进行优化,实现传染性法氏囊病病毒在60℃1h15min;80℃10min下目标核酸区段大量扩增,成功建立针对鸡传染性法氏囊病病毒的环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法.并对所建立的RT-LAMP检测方法进行灵敏性和特异性试验,结果表明,在模板浓度为994.9ng/μl并进10X稀释的情况下,所建立的RT-LAMP检测方法具有极高的灵敏性,可以检测到99.49fg/μl的样品,比RT-PCR的灵敏度高102倍左右;另外利用该方法对其他鸡传染性病毒进行检测,表现为只有鸡传染性法氏囊病病毒发生反应,表现了良好的特异性.因此所建立的传染性法氏囊病病毒RT-LAMP检测技术具有简便,灵敏,快速,特异性高的优点,可以应用于临床鸡传染性法氏囊病病毒的快速检测.
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