【摘 要】
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本研究经RT-PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,经PCR鉴定得到单一的HA条带.重组杆状病毒载体在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞.通过蛋白质电泳、免疫印迹法、血凝试验和血凝抑制试验分析表
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部动物流感重点开放实验室,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病分会第十三次学术研讨会
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本研究经RT-PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,经PCR鉴定得到单一的HA条带.重组杆状病毒载体在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞.通过蛋白质电泳、免疫印迹法、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:在sf9昆虫细胞中高效表达了分子量约66Kd的血凝素蛋白,用此蛋白免疫SPF鸡可产生较高效价的抗体,说明该蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性.
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