氮肥施用会影响土壤生态系统中微生物群落结构的变化。大棚蔬菜土壤具有高施肥量、高复种指数、高利用强度的特点。本文以连作四年的生菜大棚土壤为对象,从夏、冬两个季节研究氮肥梯度对土壤中微生物多样性、群落结构以及他们与环境变量的相关关系。通过16S rRNA基因高通量测序研究了低(N50)、中(N80)、高N(N100)等氮肥用量对土壤微生物组成的作用。实验结果表明空白对照组Actinobacteria、Acidobacteria和Chloroflexi的相对含量较高,而在施肥处理中,夏季Firmicutes含量最高、冬季Bacteroidetes含量最高。主成分分析(PCA)发现微生物群落的变化除了和氮肥用量有关外,同时也受季节变化的影响,夏季样品中,N80和N100被分为一组,而冬季样本中CK和低氮的N50分为一组,其他按照处理各自分成一组。冗余分析(RDA)结果表明,土壤中速效N,NO3--N,NH4+-N和C/N比作为主要的环境变量会影响土壤微生物群落的变化。为了进一步探明N肥使用中哪些微生物参与了该过程,我们运用回归分析进行了研究,结果表明夏季Firmicutes、Bacteroidetes和proteobacteria发生了显著的变化;而冬季中N肥显著驱动了Bacteroidetes、Actinobacteria和Acidobacteria的群落的改变。本研究为高强度利用下,长期连作菜地的微生物多样性随氮肥变化特性提供了一个事例。