【摘 要】
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腺苷同型半胱氨酸水解酶是体内控制生物甲基化和同型半胱打官司酸代谢的一个重要的酶.由于铜离子抑制腺苷同型半胱氨酸水解酶的活性,因此阐明铜离子和水解酶的结合方式有重要意义.本文利用E.coli JM109菌株高效表达和纯化了重组人的S-腺苷同型半胱氨酸(AdoHcy)水解酶.利用铜离子粹灭腺苷同型半胱氨酸水解酶内源性荧光性质,测定了铜离子与腺苷同型半胱氨酸水解酶的结合常数.直接荧光滴定的结果发出铜离子
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腺苷同型半胱氨酸水解酶是体内控制生物甲基化和同型半胱打官司酸代谢的一个重要的酶.由于铜离子抑制腺苷同型半胱氨酸水解酶的活性,因此阐明铜离子和水解酶的结合方式有重要意义.本文利用E.coli JM109菌株高效表达和纯化了重组人的S-腺苷同型半胱氨酸(AdoHcy)水解酶.利用铜离子粹灭腺苷同型半胱氨酸水解酶内源性荧光性质,测定了铜离子与腺苷同型半胱氨酸水解酶的结合常数.直接荧光滴定的结果发出铜离子与腺苷同型半胱氨酸水解酶(单体)1:1结合.在EDAT金属缓冲体系下,用荧光粹灭的方法测定铜离子与腺苷同型半胱氨酸水解酶结合常数为K<,d>=0.622±0.07×10<-16>mol·L<-1>,与文献结果一致(Ettinger et al.JBC,1995,270,20703-11);而在NTA缓冲体系下结合数学为K<,d>=1.83±0.03×10<-10>mol·L<-1>;在Glycine缓冲体系下结合常数为K<,d>=0.92±0.02×10<-10>mol·L<-1>.用不同金属缓冲体系测定的铜离子和腺苷同型半胱氨酸水解酶的结合常数相差可达六个数量级,这是一个值得深入探讨的现象.然而,这一结果提示应用金属缓冲体系测定金属离子与蛋白质的高亲和的结合常数应当慎重.
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