基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan Real-Time PCR检测方法的建立及应用

来源 :2013年中国水产学会鱼病专业委员会学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cart008
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  目前国内己发现至少三种基因型的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)存在,不同基因型之间GCRV编码蛋白存在较大差异.GCRV S6片段推测编码病毒主要外衣壳蛋白,在目前已发现的GCRV中普遍存在,同一基因型内具有高度的保守性.根据基因Ⅰ型GCRV的S6保守序列,分别设计扩增目的条带661bp普通引物(P1、Pz)、扩增目的条带159bp荧光定量引物(F1、F2)和一条探针;同时构建含有目的片段的PVAX-S6重组质粒作为标准质粒,10倍梯度稀释构建质粒拷贝数与CT值的标准曲线(Y=-3.389X+38.076).
其他文献
利用PCR技术和重叠延伸(SOEing)PCR技术分别扩增罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQ0910株甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、表面免疫原性蛋白(SIP)、GAPDH-SIP基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建质粒pCDNA-GAPDH、pCDNA-SIP、pCDNA-SIP-GAPDH.以各重组质粒、pCDNA3.1(+)及生理盐
会议
本研究首先以热酚水抽提法提取致病溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)强毒株HN08155 和弱毒株HN08152的粗脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS);以弱毒株HN08152和大肠杆菌(Escherichia coli)LPS作对照,将不同浓度的溶藻弧菌强毒株HN08155粗LPS通过腹腔注射法接种点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus),
Largemouth Bass Micropterus salmoides is an economically important freshwater fish cultured in China.The new emerging viral diseases evoked by iridovirus and rhabdovirus have caused great economic los
草鱼呼肠孤病毒HZ08毒株S10基因编码一个长达345个氨基酸的蛋白质VP38,该编码蛋白与MRV和ARV的σNS蛋白具有很近的亲缘关系,推测可能具有相似的功能。为了研究S10编码蛋白的功能,本研究采用PCR方法扩增草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10基因节段,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得的重组表达载体pET32a-S10,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,
Cyprinid herpesvirus 2 (CyHV-2) is an emerging pathogen in the commercially exploited fish, gibel carp (Carassius auratus gibelio), which has caused huge economic loss in China and appears to be sprea
本研究利用杆状病毒表达系统表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白,利用噬菌体抗体展示技术筛选抗SVCV单链抗体(scFv).将SVCV糖蛋白基因(G)插入到供体质粒pFastBacHTA中,再用构建的质粒pFastBac-G转化E.coli DH10αBac感受态细胞,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含G基因的重组穿梭载体Bacmid-G,通过脂质体介导将Bacmid-G转染对数生长期的Sf9细胞,获
鲤科疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)又称锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus,KHV)可造成鲤鱼和锦鲤大规模发病死亡。目前鲤科疱疹病毒3型病毒病已在世界各地广泛流行。鲤科疱疹病毒3型病毒病作为输入型的疾病已严重威胁到我国鲤鱼和锦鲤的养殖安全。我们对我国鲤鱼及锦鲤的主要养殖地区河南和广东进行了鲤科疱疹病毒3型流行病学初步调查,分析了其基因型,探讨该病
本研究从患病锦鲤中分离到一株鲤科疱疹病毒3型(CyHV-3)毒株,命名为HZ419,对该毒株的Marker Ⅰ、Marker Ⅱ位点克隆后测序分析表明,该毒株Marker Ⅰ位点与已报道的日本株和印度尼西亚株相同,表现为Ⅰ++;但其MarkerⅡ位点与日本株或印度尼西亚株不同,表现为一种新的基因型。根据该毒株的序列特点,针对MarkerⅠ、MarkerⅡ位点建立了多重PCR的分型方法,结果显示,该
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目的 探讨检测锦鲤疱疹病毒三种不同的PCR方法的比较以及不同保存条件对锦鲤疱疹病毒的稳定性的影响。方法: 根据OIE推荐的基因(TK基因和Sph基因),设计合成3对特异性引物,针对胸苷激酶基因(TK)、聚合酶基因(Sph)和AF411803基因进行PCR检测。采集8条患有锦鲤疱疹病毒病的锦鲤的鳃和肾脏,将每条锦鲤的组织保存在6种不同的条件下,利用PCR方法和鱼原毒组织感染健康鱼检测锦鲤疱疹病毒的活