【摘 要】
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甾体皂苷是存在于中药中的一类重要的活性成分,传统的分离分析是多采用反相HPLC,但部分甾体皂苷无法得到良好的分离.超临界流体色谱(SFC)是一种具有正相分离性能的色谱,且绿色环保.本课题组对SFC 在甾体皂苷(螺甾皂苷和呋甾皂苷)的分离纯化中的应用进行了系统的研究.通过优化色谱柱、改性剂、添加剂、柱温等色谱条件,确定了SFC分离螺甾皂苷和呋甾皂苷的一般色谱条件,了解了其在SFC 上的色谱行为规律,
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市太平路27号,100850 沃特世科技(上海)有限公司,
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甾体皂苷是存在于中药中的一类重要的活性成分,传统的分离分析是多采用反相HPLC,但部分甾体皂苷无法得到良好的分离.超临界流体色谱(SFC)是一种具有正相分离性能的色谱,且绿色环保.本课题组对SFC 在甾体皂苷(螺甾皂苷和呋甾皂苷)的分离纯化中的应用进行了系统的研究.通过优化色谱柱、改性剂、添加剂、柱温等色谱条件,确定了SFC分离螺甾皂苷和呋甾皂苷的一般色谱条件,了解了其在SFC 上的色谱行为规律,并且成功的运用SFC 对3 对C-25R/S 的螺甾皂苷异构体进行了分离制备.螺甾皂苷：选取实验室分离制备的20 个具有不同糖基、羟基、双键以及不同连接位置的螺甾皂苷单体化合物为研究对象,按照其化学结构的特征分成4 组：化合物1-5 的苷元相同,仅C-3 位的糖链不同；化合物6a 和6b 的苷元相同,仅C3 位糖链末端糖基上羟基构型不同；化合物7-13 的C-3 位糖链相同,仅苷元上双键、羟基的个数和位置有差异；化合物14-19 为3 种皂苷元和其对应的C-3 位糖基的种类和个数不同的螺甾皂苷.系统的考察了色谱柱、改性剂、添加剂、柱温和背压等色谱参数对螺甾皂苷分离的影响,在优化的色谱条件下,对4 组结构及极其类似的化合物分别进行分离,并与反相HPLC 的分离效果进行对比[1].呋甾皂苷：选取实验室分离制备的3 个呋甾皂苷单体化合物为研究对象,系统的考察了色谱柱、改性剂、添加剂和柱温等色谱参数对呋甾皂苷在SFC 上的保留行为以及C22-OH 发生衍生化的影响.经过优化,最后采用Diol 色谱柱,以超临界CO2-甲醇/水/氨水(96.8/3/0.2,v/v/v)为流动相,在40 ℃柱温和1600 psi 背压条件下,22 min 内完成10 个结构相近的呋甾皂苷混合样品的分离[2].螺甾皂苷的制备：通过色谱条件的优化,采用两根串联的CHIRALPAK IC 色谱柱,以甲醇作为改性剂,成功分离制备得到3 对C-25 R/S 螺甾皂苷混合物的单一异构体[3].结论：苷元相同、仅糖链不同的螺甾皂苷和呋甾皂苷在SFC 上都能实现良好的分离；糖链相同、仅苷元上羟基不同的螺甾皂苷在SFC 上能良好的分离,但苷元上仅双键不同的螺甾皂苷未能实现分离；螺甾皂苷的同分异构体(除双键位置异构)在SFC 上能实现良好分离,观察的呋甾皂苷的同分异构体在SFC 上未能分离,但其它结构差异的相似呋甾皂苷也能实现分离.总之,SFC 对结构类似的螺甾皂苷具有良好的分离效果,并与反相HPLC 具有一定互补性.SFC 对大极性的呋甾皂苷亦有一定的分离效果,也可用于呋甾皂苷的分离.
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