【摘 要】
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目的:建立缓症链球菌(Streptococcus mitis)与牙龈上皮细胞(Ca 9-22)相互作用的体外模型,研究不同表型细菌对上皮细胞内噬作用的影响。方法:牙龈上皮细胞Ca 9-22接种于24孔板,5%C
【机 构】
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中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院·牙体牙髓病科广东省口腔医学重点实验室;
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目的:建立缓症链球菌(Streptococcus mitis)与牙龈上皮细胞(Ca 9-22)相互作用的体外模型,研究不同表型细菌对上皮细胞内噬作用的影响。方法:牙龈上皮细胞Ca 9-22接种于24孔板,5%CO237℃温箱中孵育24h,使其铺满整个孔底(≥80%贴壁率)。缓症链球菌培养于纤维素薄膜滤纸表面,置于BHI平板上孵育24h,形成生物膜;取对数生长期的细菌悬浮液,将其浓度调整为6×108CFU/ml。将上述制备的缓症链球菌两种表型(悬浮液和生物膜表型)与铺满孔底的牙龈上皮细胞以不同感染复数(细菌数量/被感染细胞数量:MOI)10,100,500和1000置于5%CO237℃温箱中共孵育3h(细胞培养基作为阴性对照)。抗生素保护实验分析细胞内噬不同表型细菌能力的差异,MTT实验及RT-qPCR检测共培养模型中细胞活力及炎症因子表达的变化情况。结果:对于不同表型细菌来讲,当MOI为500时,细胞内噬细菌的能力受到明显抑制,余三个MOI实验组细胞内噬细菌的能力无明显差异;而对于相同MOI水平,细胞内噬沉淀浮游态细菌的能力与内噬生物膜表型细菌的能力相似,均明显高于游离浮游态细菌。细胞活力检测发现当MOI为500时,不同表型细菌均能抑制90%的细胞活力;RT-qPCR结果则提示在此MOI浓度作用下,三种炎症因子IL-1β,IL-6,IL-8的表达明显受抑制。结论:沉淀浮游态细菌与生物膜态细菌可通过抑制炎症因子表达,降低细胞活力,从而逃避细胞的内噬,提示在临床口腔感染性疾病发生发展过程中,沉淀浮游态细菌与生物膜态细菌在逃避宿主免疫吞噬、加速炎症扩散等病理生理过程发挥重要作用。
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