体外模拟微环境诱导骨髓间充质干细胞向心肌组织样结构分化的初步研究

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采用SD大鼠心肌组织裂解液诱导骨髓来源的间充质干细胞分化为心肌组织。倒置显微镜观察形态学变化,免疫细胞化学显色及透射电镜、扫描电镜鉴定,探讨微环境对骨髓间充质干细胞向心肌组织样结构分化的影响。实验选用生长良好的第3代骨髓间充质干细胞(MSCs)分为:(1)空白对照组:采用10%FBS的L-DMEM培养液;(2)心肌组织裂解液诱导组:心肌组织裂解液与含20%FBS的HDMEM等体积混合培养;(3)心肌细胞上清液诱导组:收集心肌细胞培养上清液制备条件培养液培养MSCs;观察比较各组MSCs在形态、结构、功能的改变。结果显示,心肌组织裂解液能使骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞。对心肌样细胞进行α-actin、connexin 43免疫细胞化学显色阳性;透射电子显微镜下可见闰盘,且心肌细胞胞浆内有丰富的细胞器,大量排列整齐的肌丝形成明暗相间的肌节;可见自律性搏动(频率90~115次/分);随着诱导时间的延长,出现以成纤维样细胞(波形蛋白表达阳性)膜状包裹的肌束样结构,内部可见中空性结构,其内表面分布单层排列的、胞浆少、核微凸的内皮样细胞,其Ⅷ因子相关抗原表达阴性,可能由于功能的缺失,导致分化上的差异。提示心肌组织裂解液包含已知和未知的组分,能更好地模拟心肌组织的微环境,具有"环境依赖性分化"特性的骨髓间充质干细胞,不但能向心肌样细胞发育、分化,且能形成心肌组织样结构。
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