目的:类固醇激素作为运动机能兴奋剂,通过增加蛋白质合成、促进肌肉发达和红细胞生成,增强力量和耐力,目前受到国际奥委会的严格监控。本研究建立运动员血清中类固醇的LC/MS/MS快速分析方法,实现对11种类固醇激素的日常监控及分析预警,维护运动员身体健康和比赛公平。方法:选取3名非运动员作为空白组,3名铁人三项运动员作为实验组,每日晨取静脉血200μl,分离血清样本。将血清样本蛋白沉淀后,上清液经稀释后进行LC-APCI/MS/MS分析,色谱柱为:PhenomenexKinetex,2.6μC18,100×3.00mm,分析时间17min。利用经活性炭净化的血清空白样本配制成一系列浓度的标准溶液,建立校正工作曲线。根据实际人体血清临床样本的浓度确定标准曲线的范围。实验前对空白血清样本进行检测,以排除分析物的内源性本底。结果:通过优化的血清类固醇LC/MS/MS快速分析方法,在15min内获得11种类固醇类化合物的血清基质加标色谱图,包括:脱氢表雄酮硫酸盐(DHEAS)、脱氢表雄酮(DHEA),皮质醇、皮质酮、11-脱氧皮质醇,雄烯二酮、睾酮、17-羟基-黄体酮、黄体酮、雌二醇和25-羟基维生素D3。11种类固醇激素特征峰分离清晰,基线平整,背景噪声低,可以对各激素进行日常定量分析。结论:建立并优化了血清中类固醇的LC/MS/MS快速检测分析方法,通过HPLC与GC-MS相结合的方法,将样本经过高效液相色谱后再衍生化,进行GC-MS全扫描分析,获得适当的分析标记物,一次进样即可同时分析血清样本中11种类固醇类化合物,获得标准峰,对其在运动员血清中的含量进行定量分析,判定运动员类固醇激素水平是否正常。本研究为检测和监控运动员血清中多种类固醇类激素的含量提供了更准确的测定方法和判断证据。