为建立一种灵敏、高效、高通量的鸡群H7N9亚型禽流感病毒抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法.通过昆虫杆状病毒表达系统分别表达了属于W1、W2-A和W2-B分支H7N9流感病毒的三种野生型血凝素(HA)蛋白,以及跨膜区(TM)置换为H3HA TM的W2-B分支HA蛋白(H7-53TM).四种HA蛋白经过离子交换层析纯化后作为抗原,通过ELISA检测H7N9禽流感病毒抗体.ELISA特异性、敏感性和重复性试验结果显示,跨膜区置换主要影响HA蛋白ELISA检测的重复性,以H7-53TM为抗原的ELISA方法具有较好的重复性,其批内和批间变异系数小于10％,而三种野生型HA蛋白与部分血清反应批内和批间变异系数大于10％,重复性较差,因此选择H7-53TM蛋白作为ELISA包被抗原.通过ROC曲线分析,以H7-53TM为抗原的ELISA方法线下面积为1.0±0.0(P＜0.0001),能够精准地区分H7N9亚型流感病毒抗体阳性和阴性血清.通过相关性分析,该ELISA方法与134份鸡血清HI试验结果具有显著强相关性,并且与3个分支疫苗株免疫血清的HI试验结果也具有显著相关性.因此,本研究表明跨膜区置换能够提高HA蛋白抗原检测H7N9禽流感病毒抗体的重复性,并应用跨膜区置换的HA蛋白建立了一种能够检测不同分支疫苗株免疫的H7N9亚型禽流感病毒抗体间接ELISA检测方法.