【摘 要】
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目的 体外分离培养人表皮干细胞(ESC),并探讨外源性NO对ESC脱黏附、增殖和迁移功能的影响.方法 采用改良后Ⅳ型胶原快速黏附法分离、培养细胞,倒置相差显微镜下观察细胞
【机 构】
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400038 重庆第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
【出 处】
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第十届全国烧伤救治专题研讨会暨福建省第八次烧伤外科学术研讨会
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目的 体外分离培养人表皮干细胞(ESC),并探讨外源性NO对ESC脱黏附、增殖和迁移功能的影响.方法 采用改良后Ⅳ型胶原快速黏附法分离、培养细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态学；采用蛋白质印迹法和细胞免疫荧光染色法观察ESC标志物整合素p.和角蛋白19(CKl9)自4J表达.采用不同浓度NO供体SNAP fo、1、10、100、500.mnol/g),于划痕后12、24h检测SNAP对ESC迁移能力的影响；Transwell实验检测趋化能力的影响(计数趋化转膜细胞数)；黏附实验检测SNAP对ESC黏附功能的影响,计算黏附抑制率；于SNAP作用0(即刻)、12、24、48、72h检测其对ESC增殖功能的影响,数据以吸光度值表示.结果 (1)倒置相差显微镜下可见,培养5～9d小克隆形成,胞体紧密相靠,呈“铺路石样”生长；培养10～14d,细胞增殖明显加快,小克隆变大且相互连接成圆形、椭圆形或不规则形状的大克隆,或70％～80％gEl胞融合.蛋白质印迹法和细胞免疫荧光染色法显示,分离的细胞均能表达CKl9和整合素pl.由此,该细胞鉴定为ESC.(2)与0.gmol/L SNAP比较,划痕后12、24h 1-100.gmol/L SNAP均能促进ESC迁移,其中100邺nol/L SNAP迁移率达峰值『分别为(48.8±2.7m、(82lil5.8)％,F值分别为195.44、27.90,P值均小于0.01.Transwell实验显示,100.gmol/L SNAP处理后转膜细胞数显著多于0邺nol/L SNAP(卢21.52,P 0.00).黏附实验表明,SNAP浓度越高对ESC粘附功能的抑制作用越强；增殖实验表明,1-500.gmol/L SNAP在各时相点均促进ESC增殖.结论 外源性NO对体外培养人ESC具有脱黏附、促增殖作用；适宜浓度的外源性NO对体外培养人ESC的迁移功能有促进作用.
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