论文部分内容阅读
目的:通过构建肿瘤细胞失巢模型,探究在此细胞模型中ADAM10剪切p75NTR对肿瘤细胞生物学行为的影响及其下游NF-KB通路的激活情况,探讨肿瘤失巢凋亡抵抗相关分子机制及其对肿瘤转移的影响。材料与方法:采用免疫组织化学的方法检测ADAM10和P75NTR在不同转移情况口腔鳞癌组织中的表达,并使用SPSS 22.0统计其相关性;通过2-Hydroxyethyl Methacrylate Polymer(Poly-HEMA)包被培养皿建立肿瘤细胞失巢培养模型;采用流式细胞术和蛋白免疫印迹实验检测肿瘤细胞在不同培养条件下的凋亡水平;通过细胞增殖、迁移、侵袭实验观察不同ADAM10表达水平肿瘤细胞的生物学行为;通过P75NTR ECD酶联免疫吸附检测试剂盒检测肿瘤细胞培养上清中P75 NTR ECD的分泌;采用软琼脂克隆形成实验检测单个肿瘤细胞的克隆形成能力;通过激光共聚焦显微镜观察肿瘤细胞p65入核情况。通过裸鼠尾静脉注射的方法构建肿瘤肺转移模型,观察不同ADAM10表达水平肿瘤细胞的转移能力。结果:高转移口腔癌组织标本和高转移肿瘤细胞系HN-12和MDA-MB-231中ADAM10高表达;ADAM10蛋白水解活性与肿瘤细胞侵袭性呈正相关,与失巢培养细胞凋亡水平呈负相关,但不影响单层贴壁培养细胞增殖活性和凋亡水平。ADAM10高表达细胞可剪切p75NTR产生ICD和ECD两个片段,其中ICD段抑制失巢细胞凋亡,ECD段和p75NTR全长对失巢培养细胞凋亡水平没有影响;p75NTR ICD可促进失巢细胞p65入核并使IκB-α磷酸化,进而激活NF-k B信号通路;p75NTR ICD可以促进失巢细胞TRAF6表达上升,ECD段和p75NTR全长对失巢细胞TRAF6表达无影响。裸鼠尾静脉注射ADAM10高表达肿瘤细胞肺转移能力比ADAM10低表达肿瘤细胞强,外源性转入p75NTR ICD可提高ADAM10低表达肿瘤细胞的肺转移能力。结论:ADAM10的表达与肿瘤转移相关,ADAM10高表达肿瘤细胞具有失巢凋亡抵抗能力,但其表达对单层贴壁培养细胞增殖活性和凋亡水平无影响;ADAM10剪切p75NTR产生的ICD段是引起ADAM10介导的细胞失巢凋亡抵抗,促进肿瘤转移的活性片段;肿瘤细胞失巢时,p75NTR ICD可招募其伙伴分子TRAF6并促使其表达上升,进而激活失巢细胞NF-k B通路。肿瘤细胞ADAM10的表达与裸鼠肿瘤肺转移的能力呈正相关,过表达p75NTR ICD可促进ADAM10低表达肿瘤细胞肺转移。